بررسی مسیر آپوپتوزی عصاره سیاه تخمه (Agrostemma githago) روی پروماستیگوت‌های لیشمانیا ماژور

خلاصه فارسی

سابقه و هدف: لیشمانیوز گروهی از بیماری‌های عفونی است که توسط گونه‌های مختلف جنس لیشمانیا ایجاد می‌شود و تظاهرات بالینی آن به فرم‌های مختلف دیده می‌شود. مقاومت انگل نسبت به داروهای خط اول و دوم درمان در نقاط مختلف جهان در حال افزایش می‌باشد. با توجه به اثر ضد لیشمانیایی عصاره سیاه تخمه این مطالعه با هدف بررسی اثر القایی آپوپتوز عصاره سیاه تخمه (Agrostemma githago) روی پروماستیگوت‌های لیشمانیا ماژور با استفاده از اندازه گیری میزان فعالیت آنزیم‌های کاسپاز 3 و 7 و میزان فسفاتیدیل سرین انجام گرفت. مواد و روش‌ها: پس از تهیه عصاره سیاه تخمه، پروماستیگوت‌های انگل لیشمانیا ماژور در محیط کشت BHI با غلظت IC50 (0/4 میلی گرم در میلی لیتر) عصاره سیاه تخمه تیمار شدند. فعالیت آنزیم‌های کاسپاز 3 و 7 و همچنین رنگ آمیزی توسط کیت انکسین پی‌ای (Annexin V/PI) به ترتیب به روش اندازه گیری نشر نور لومینیسانس و فلوسایتومتری بررسی شد. یافته‌ها: نتایج نشان داد که میزان فعالیت آنزیم‌های کاسپاز 3 و 7 در گروه تیمار با غلظت 0/4 میلی گرم در میلی لیتر عصاره سیاه تخمه، در مقایسه با گروه کنترل که شامل صرفا پروماستیگوت‌های لیشمانیای ماژور به تعداد 107×1سلول بود به صورت معناداری (P<0.001)افزایش داشت. همچنین تیمار پروماستیگوت‌های لیشمانیا ماژور با غلظت IC50 عصاره Agrostemma githago و بررسی القای مسیر آپوپتوزی در این سلول‌ها توسط کیت Annexin V/PI پس از 24 و 48 ساعت از تیمار نشان داد جمعیت سلول‌های آپوپتوز اولیه و ثانویه در مقایسه با گروه کنترل به صورت معناداری (P<0.001) افزایش داشت، همچنین افزایش مدت زمان تیمار تا 48 ساعت سبب شد تا از درصد سلولها در زیر گروه آپوپتوز اولیه کاسته و به زیرگروه آپوپتوز ثانویه افزوده شود. نتیجه گیری: افزایش فعالیت آنزیم‌های کاسپاز 3 و 7 و همچنین میزان فسفاتیدیل سرین در لایه بیرونی غشای پروماستیگوت لیشمانیا نشان دهنده القا موثر فرایند آپوپتوز پیرو تیمار با عصاره Agrostemma githago می‌باشد.

عنوان انگليسی

Evaluation of apoptotic pathway of Agrostemma githago extract on Leishmania major promastigotes

خلاصه انگلیسی

Background and objective: Leishmaniasis is a group of infectious diseases caused by various species of protozoa of the genus leishmania. Clinical symptoms of leishmaniasis are different. Resistance to the first and second-line drugs is increasing in different areas of world. According to the anti-leishmanial effect of Agrostemma githago extract, this study was conducted to evaluation of apoptotic pathway of Agrostemma githago extract on Leishmania major promastigotes using caspase 3/7 enzymes and annexin V/PI activity. Methods: After preparation of the extract, leishmania major promastigotes were treated with IC50 dose (0.4 mg / ml) of Agrostemma githago in BHI medium. The activity of Caspase 3 and 7 enzymes as well as staining by Annxin V/PA kit were measured by luminescence emmision and flow cytometry, respectively. Results: The results of this study showed that the activity of Caspase 3 and 7 enzymes in the treatment group with a concentration of 0.4 mg / ml of Agrostemma githago was significantly increased compared to the control group which contains 1 × 107 of Leishmania major alone (P <0.001). Treatment of Leishmania major promastigotes with IC50 concentration of Agrostemma githago extract and evaluation of induction of apoptotic pathway in these cells by annexin-V/ PI kit after 24 and 48 hours of treatment showed an increament in the population of early and late apoptotic cells compared with control group (P <0.001). In addition, the percentage of late apoptotic subgroup was incresed in 48 hours treatment, in comparision to 24 hours of treatment. This accumulation at the late apoptotic pupulation was accompanied by a decrease of the cell populations in the early apoptotic subgroup (P<0.001). Conclusion: Increased Caspase enzymes activity and the augmentaion of phosphatidylserine in the outer membrane of Leishmania promastigote parasites indicates an effective apoptosis induction following Agrostemma githago extract treatment.

Document Downloads