title

سنتز کنژوگه منوکلونال آنتی بادی تراستوزومب با آسپارژیناز و مطالعه اثرات کشندگی آن بر روی رده سلولی سرطان معده (AGS)

جوهری اهر, محمد ، افسر, طه (1398) سنتز کنژوگه منوکلونال آنتی بادی تراستوزومب با آسپارژیناز و مطالعه اثرات کشندگی آن بر روی رده سلولی سرطان معده (AGS). دکتری حرفه ای (پایان نامه) دانشگاه علوم پزشکی اردبیل.

متن کامل





[img]
پیش نمایش
متنی - گزارش نهایی طرح تحقیقاتی/ پایان نامه
1MB
[img]
پیش نمایش
متنی - گزارش نهایی طرح تحقیقاتی/ پایان نامه
129kB
[img] متنی - گزارش نهایی طرح تحقیقاتی/ پایان نامه
محدود به فقط پرسنل سامانه

2MB
[img] متنی - گزارش نهایی طرح تحقیقاتی/ پایان نامه
محدود به فقط پرسنل سامانه

6MB

خلاصه فارسی

مقدمه طبق آمارهای جهانی سرطان یکی از مهمترین عوامل مرگ و میر در جهان است.از میان سرطان های شناخته شده سرطان معده از کشنده ترین آنها به شمار می آید. به دلیل جمعیت بالا، قاره آسیا بالاترین تعداد تشخیص سرطان معده و بالاترین میزان مرگ و میر را داراست. همچنین ایران نیز جز مناطقی محسوب می شود که ریسک سرطان معده در آن بالاست و در گزارش سازمان بهداشت جهانی به این نکات اشاره شده است. بنا بر گزارش وزارت بهداشت ، درمان و آموزش پزشکی ایران به دلیل تلفات و هزینه بالای سرطان معده، در استان اردبیل نیز این سرطان از اهمیت خاصی برخوردار است. روشهای موجود و داروهای شیمی درمانی حاضر مضاف بر عوارض بالا موفقیت قابل قبولی را در درمان بیماران سرطان معده بدست نیاورده اند و یافتن داروهای جدید با اثربخشی بالا و عوارض پایین امری ضروری و اجتناب ناپذیر به نظر می رسد. برای رسیدن به اثربخشی بالاتر و عوارض پایین تر داروی شیمی درمانی آسپاراژیناز را با مونوکلونال آنتی بادی تراستوزومب کنژوگه کرده و اثرات آن را بر روی سلول های سرطان معده بررسی کردیم. مواد و روش ها در مرحله اول، مونوکلونال آنتی بادی تراستوزومب توسط لینکر دی سولفیدی 3،3′-دی تیودی پروپیونیک اسید دی(ان-هیدروکسی سوسینیمید استر) (DSP) فعال شد تا انتهای آمینی اسید آمینه های لیزین با لینکر متصل شود. سپس آنزیم آسپاراژیناز با نسبت مولی برابر با آنتی بادی به آن اضافه گردید این مخلوط به مدت 48 ساعت برای انجام واکنش در دمای یخچال نگهداری شد و پس از آن برای خالص سازی مواد واکنش نداده دیالیز انجام گرفت. برای اثبات اتصال صحیح از الکتروفورز و پراکندگی نوری دینامیکی استفاده گردید. برای بررسی اثرات سمیت و آپوپتوز سلولی از رنگ آمیزی آکریدین اورنج و اتیدیوم بروماید استفاده گردید. نتایج با استفاده الکتروفورز پلی آکریل آمید در حضور سدیم دودسیل سولفات کنژوگاسیون آنتی بادی با آسپاراژیناز اثبات گردید و با بررسی پراکندگی نوری دینامیکی افزایش اندازه و تغییر بار سطحی پس از کنژوگاسیون مونوکلونال آنتی بادی با آنزیم آسپاراژیناز اثبات گردید. نتایج مطالعه با رنگ آمیزی آکریدین اورنج و اتیدیوم بروماید برای بررسی آپوپتوز با میکروسکوپ فلورسنت نشان داد آن دسته از سلول هایی (سرطان معده) که با کنژوگه تراستوزومب-آسپاراژیناز تیمار شدند آپوپتوز بیشتر را در مقایسه با گروه های آسپاراژیناز به تنهایی، تراستوزومب به تنهایی و گروه کنترل نشان دادند. نتیجه گیری مطالعات ما نشان داد امکان اتصال آنتی بادی مونوکلونال تراستوزومب با آنزیم آسپاراژیناز با استفاده از لینکر دی سولفیدی وجود دارد و این اتصال باعث تقویت اثر آپوپتوزی می شود. البته این مطالعات در سلول های کشت داده شده انجام شد و به صورت کیفی میزان آپوپتوز ناشی از کنژوگه بررسی گردید. در مطالعات بعدی میزان مرگ و میر سلولی ناشی از کنژوگه حاصل از نظر کمی در مطالعات حیوانی بررسی خواهد شد.

عنوان انگليسی

Synthesis of Asparaginase-conjugated Trastuzumab monoclonal antibody and study of its cytotoxic effect on gastric cancer cell line (AGS)

خلاصه انگلیسی

Introduction According to global statistics, cancer is one of the most important causes of death in the world. Among the known cancers, gastric cancer is one of the most deadly. Due to the high population, Asia has the highest incidence of gastric cancer and the highest mortality rate. Iran is also one of the areas where the risk of gastric cancer is high, and the World Health Organization report points to these. According to the Iranian Ministry of Health and Medical Education, due to the high cost and fatality of gastric cancer, this cancer has particular importance in Ardabil province. Existing methods and current chemotherapy drugs have not achieved satisfactory success in the treatment of gastric cancer patients and finding new drugs with high efficacy and low side effects seems unavoidable. To achieve higher efficacy and lower side effects, we conjugated the drug aspartaginase with the monoclonal antibody trastuzumab and examined its effects on gastric cancer cells materials and methods In the first step, the trastuzumab monoclonal antibody was activated by the 3,3′-dihydro-propionic acid (N-hydroxysuccinimide ester) (DSP) disulfide linker to link the end of lysine amino acid to the linker. The asparaginase enzyme was then added to it with a molar ratio of antibody. The mixture was kept at refrigerator temperature for 48 hours and then dialysed to purify the unreacted material. Electrophoresis and dynamic light scattering were used to prove correct binding. To investigate the effects of cellular toxicity and apoptosis, acridine orange and ethidium bromide staining were used. Results Using polyacrylamide electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate, antibody conjugation with asparaginase was demonstrated, and dynamic light scattering showed increase in size and surface charge change after monoclonal antibody conjugation with asparaginase. The results of Acridine Orange and Ethidium Bromide staining with fluorescent microscope for apoptosis studies showed that those cells treated with trastuzumab-asparaginase conjugate showed higher apoptosis than the asparaginase alone group,trastuzumab alone group And control group. Conclusion Our studies showed that binding of monoclonal trastuzumab antibody to the asparaginase enzyme using disulfide linker enhances the apoptotic effect. However, these studies were performed on cultured cells and qualitively evaluated the amount of apoptosis induced by the conjugate. Subsequent studies will quantitatively evaluate the cell death caused by the conjugate in animal studies.

نوع سند :پایان نامه (دکتری حرفه ای )
زبان سند : فارسی
استاد راهنما :محمد جوهری اهر
دانشجو :طه افسر
کلیدواژه ها (فارسی):داروی کنژوگه، مونوکلونال آنتی بادی، آسپاراژیناز ، تراستوزومب
کلیدواژه ها (انگلیسی):Conjugate drug, Monoclonal Antibody, Asparaginase, AGS, Trastuzumab
موضوعات :WI سیستم گوارشی
بخش های دانشگاهی :دانشکده داروسازی > بخش شیمی دارویی
دانشکده داروسازی > واحد پژوهش - پایان نامه های دفاع شده
کد شناسایی :12696
ارائه شده توسط : آقای فرهاد خدایی
ارائه شده در تاریخ :21 بهمن 1398 07:58
آخرین تغییر :31 خرداد 1400 08:45

فقط پرسنل کتابخانه صفحه کنترل اسناد

Document Downloads

More statistics for this item...