title

مطالعه اثر سايتوپاتيك آنزيم اوره‌آز هليكوباكتر پيلوري بر كشت سلول HeLa

نوری زاده, عزت and شکوهی گوگانی, بهروز and لطیفی نوید, سعید (1385) مطالعه اثر سايتوپاتيك آنزيم اوره‌آز هليكوباكتر پيلوري بر كشت سلول HeLa. دانشور، مجله علمي پژوهشي دانشگاه شاهد ــ 13 (62). pp. 63-68. شاپا 1028-3188

[img]
Preview
Text - Published Version
178kB

Official URL: http://www.shaheddaneshvar.ir

Persian Abstract

مقدمه و هدف: امروزه شواهد متعددي نشان مي‌دهد كه هليكوباكترپيلوري ازعوامل مهم در ايجاد گاستريت مزمن و زخم معده و اثني‌عشر است. اين باكتري در لاية مخاطي ديده مي‌شود و در مجاورت سلول‌هاي اپي‌تليال قرار مي‌گيرد و در آنجا موجب تغييرات مخاطي، ناهنجاري‌هاي سلولي، ضايعات بافتي و التهاب مي‌گردد. يكي از ويژگي‌هاي مهم اين باكتري توليد مقدار فراوان آنزيم اوره‌آز مي‌باشد. فعاليت آنزيم اوره‌آز مي‌تواند يك عامل ويرولانس مهم باشد كه در كلنيزه شدن باكتري در مخاط معده و صدمه به مخاط نقش مهمي دارد. هدف از اين مطالعه، بررسي نقش آنزيم اوره‌آز در ايجاد ضايعات سلولي مي‌باشد. روش تحقيق: بررسي روي 100 نمونه بيوپسي صورت گرفت و براي نمونه‌ها، تست اوره سريع در محل اتاق آندوسكپي انجام شد. نمونه‌هاي بيوپسي در داخل محيط ترانسپورت به آزمايشگاه منتقل شده و روي محيط‌هاي انتخابي كشت داده شدند. سپس هويت باكتري‌هاي رشد كرده با استفاده از بررسي ميكروسكپي و تست‌هاي بيوشيميايي تعيين گرديد. كشت 80 نمونة بيوپسي مثبت بود. اثر مستقيم سوپرناتانت حاوي آنزيم اوره‌آز استخراج شده از 50 نمونة باكتريايي بر روي كشت سلول‌ هلا بررسي شد. همچنين اوره با تراكم نهايي 75/3 و 20 ميلي‌مولار به همراه سوپرناتانت حاوي آنزيم، به محيط كشت سلول هلا اضافه گرديد. به منظور بررسي عامل ايجاد كننده ضايعات سلولي از آمونياك در PBS در تراكم‌هاي نهايي 40، 32، 22، 20، 15، 10، 8، 7، 3 ميلي‌مولار استفاده شد. يافته‌ها: در حضور آنزيم اوره‌آز و تراكم 20 ميلي‌مولار اوره، رنگ محيط كشت به صورت ارغواني درآمد و اين دگرگوني نشانة توليد آمونياك به مقدار زياد مي‌باشد، همچنين واكوئل‌هاي داخل سلولي تشكيل شدند. با اضافه كردن سوپرناتانت حاوي آنزيم اوره‌آز بدون حضور اوره، واكوئل داخل سلولي مشاهده نگرديد. در تراكم كمتر از 8 ميلي‌مولار آمونياك نيز واكوئل داخل سلولي مشاهده نگرديد. از تراكم 8 ميلي‌مولار به بعد اثر سايتوپاتيك به صورت واكوئل مشاهده شد، و در تراكم 40 ميلي‌مولار آمونياك، تخريب كامل لاية سلولي بوجود آمد. بحث و نتايج: با توجه به نتايج تحقيقات به نظر مي‌رسد كه آنزيم اوره‌آز، به طور مستقيم آسيب زننده نيست بلكه آمونياك ايجاد شده در اثر هيدروليز اوره توسط آنزيم اوره‌آز است كه توكسيك مي‌باشد و موجب زخم معده و التهاب مي‌گردد.

Title

Study of the Effect of Helicobacter pylori Urease Enzyme on HeLa cell Culture

English Abstract

Today, variouse evidence indicate that helicobacter pylori is one of the signifant factors in gastric ulcer and duodenal ulcer. This bacterium is seen in mucousal layer and in vicinity of epithelial cells causes mucousa changes, cell disorders, tissue losses, and inflation there. One of the important characteristics of this bacterium is producing large amount of urease enzyme. The activity of urease enzyme can be an important virulence factor which plays an key role in causing damage to mucous, and placement of bacteriume in mucousa of stomach. In this study, the role of urease enzyme in causing cell losses was investigated. The investigation was carried out on 100 samples of biopsy and for the samples, a speedy urea test was carried out in endoscopy theatre. The biopsy samples was transferred to the laboratory in transport medium and were planted in the selected medium cultures. Then, the identify of developed bacteria were determined by microscopic investigations and biochemical tests. The cultures of 80 samples of biopsy were positive. The direct effect of supernatant containing urease enzyme extracted from 50 bacterium samples on HeLa cell was investigated. Further more, urea with a concentration of 3.75 and 20 ml.mol. as well as enzyme containing supernatant were added to HeLa cell culture medium. To investigate the causing factor of cell losses ammonia were used in PBS with concentrations of 40, 32, 22, 20, 15, 10, 8, 7 and 3 mi. mol. A presence of urease enzyme and a concentration of 20 mil. mol. of urea, the colour of the culture medium turned into purple. This change was a sign of the production of large amount of ammonia. Intercell vacuoles were also formed. By adding urease enzyme containing supernatant without the presence of urea, intercell vacuole was not observed. In concentrations of below 8 mil.mol. of ammonia, inter cell vacuole was not observed. In concentrations over 8 ml.mol. the cytopathic effect was observed in the from of vacuoles, and in the concentration of 40 mili mol. of ammonia, the full erusion of cell layer was caused. There fore, urease enzyme in not directly harmful. It is the ammonia produced by hydrolis of urea by urease enzyme that is toxis.

Item Type:Article
زبان سند : فارسی
نویسنده مسئول :عزت نوری زاده
Uncontrolled Keywords:هليكوباكترپيلوري، آنزيم اوره‌آز، كشت سلول هلا، سايتوپاتيك
کلیدواژه ها (انگلیسی):Helicobacter pylori, Urease, HeLa cell culture, cytopathic effect
Subjects:WI Digestive System
QW Microbiology and Immunology
QY Clinical Pathology
Divisions:Faculty of Medicine > Department of Basic Sciences > Department of Pathology
ID Code:1384
Deposited By: Dr Behrouz Shokouhi
Deposited On:11 Mar 1389 03:11
Last Modified:23 Nov 1391 11:09

Repository Staff Only: item control page

Document Downloads

More statistics for this item...