جداسازی و کشت اولیه سلول های ستیغ عصبی از لوله عصبی جنین جوجه

خلاصه فارسی

هدف: هدف از این مطالعه ارائه یک روش ساده و کارآمد جهت جداسازی و تعیین خصوصیت سلول‏های ستیغ عصبی از بافت لوله عصبی می‏باشد. مواد و روش‏ها: تخم مرغ‏ های نطفه‏ دار حدود 35 ساعت در دمای 38 درجه سانتی‏گراد و رطوبت نسبی 55 تا 60 درصد در داخل انکوباتور قرار داده شدند تا جنین‏ ها به‏ مراحل 10-12 طبق جدول تکاملی هامبورگر-هامیلتون رسیدند. سپس جنین‏ ها از روی سطح زرده تخم مرغ جداسازی شده و لوله عصبی از جنین جوجه جدا و به‏ مدت 24 ساعت در ظروف کشت سلولی، کشت داده شد تا سلول‏های ستیغ عصبی از آن جدا شوند. آن‏گاه لوله عصبی از کف ظروف کشت جدا و خارج شد و به سلول‏ها به‏ مدت 5 روز اجازه تکثیر و ازدیاد داده شد. در نهایت این سلول‏ها جمع‏ آوری شدند و جهت ارزیابی پروفایل بیان ژن، PCR صورت گرفت. نتایج: سلول‏های ستیغ عصبی از لوله عصبی جدا شده و در شرایط کشت گسترش یافتند. این سلول‏ها هم‏چنین نشانگرهای Slug، Sox9 و Sox10 را به‏ روش RT-PCR بیان کردند. نتیجه‏ گیری: سلول‏های ستیغ عصبی می ‏توانند در محیط آزمایشگاهی از لوله عصبی رها شده و در شرایط کشت مناسب و ساده تکثیر و گسترش یابند.

عنوان انگليسی

Isolation and primary culture of chick embryonic neural crest cells

خلاصه انگلیسی

Aim: we aimed at presenting a simple and efficient method for isolating and characterizing the neural crest cells. Material and Methods: The hen’s fertilized eggs were incubated for about 35h at 38°c and 55-60% humidity until the embryos reached to stages 10-12 according to Hamburger-Hamilton developmental stage table. Then the embryos were removed from the egg’s yolk and the neural tube was isolated and cultured for 24 h in a tissue culture dish to release neural crest cell. Then after, the neural tube was removed and allowed to NCC to expand for further 5 days. Finally, the cells were collected and subjected to PCR to study their gene expression profile. Results: The neural tube released NCC and these cells proliferated in culture condition. They also expressed markers including Slug, Sox9 ,and Sox10 by the RT-PCR method. Conclusion: The neural tube can release NCC in culture condition and these cells can proliferate in the presence of an appropriate medium.

Document Downloads