جداسازی سلولهای بنیادی و پیش ساز عصبی از مغز موش بالغ بروش ایجاد نوروسفر با تکنیک برش گیری از مغز

Persian Abstract

ناحيه تحت بطني (Subventricular Zone=SVZ) در سیستم بطنی مغز پستانداران بالغ داراي جمعيتي ازسلولهاي بنيادي عصبي است که نورونها و سلولهاي گليال را ايجاد مي کنند. به دليل کمبود مارکرهاي خاص براي شناسايي اين سلولها روش ايجاد نوروسفر (NSA = Neurosphere Assay) در محيط آزمايشگاهي روشی متداول و انتخابي براي جداسازي، مطالعه و درک بيولوژي سلولهاي بنيادي عصبي روياني و بالغ مي باشد. هدف از اين مطالعه ارائه روشی جديد و مناسب براي جداسازی تعداد بیشتری از سلولهای بنیادی و پیش ساز عصبی از مغز موش بالغ با استفاده از روش NSA مي باشد. روش کار: ناحيه تحت بطني نيمه سري بطنهاي طرفي مغز موش بالغ با دو روش مرسوم یعنی تشریح یکپارچه این ناحیه و روشی نو یعنی روش برشگیری از این ناحیه تشریح و جداسازي شده و براساس روش نوروسفر کشت داده شدند. پس از هفت روز نوروسفرهاي اوليه حاصله از دو روش شمارش شده وميانگين آنها با همديگر مقايسه گرديد. يافته ها : توزيع و پراکندگي سلولهاي نوروسفرساز ( سلولهاي بنيادي و پیش ساز عصبي) درطول محور قدامي- خلفي نيمه سري بطنهاي طرفي يکسان نبوده و ميانگين تعداد نوروسفرهاي بدست آمده در روش برش گيري بسيار بيشتر از روش اول بود (0001/0> P). نتيجه گيري : روش برش گيري بدليل جداسازی تعداد بیشتری از سلولهای بنیادی و پیش ساز عصبی از ناحيه تحت بطني بطنهای طرفی نسبت به روش معمول یا کشت يکجاي اين ناحيه، روشي کار آمد و مناسب مي باشد. کلمات کليدي: سلول بنيادي عصبي، ناحيه تحت بطني، روش ايجاد نوروسفر.

Title

Isolation of neural stem and progenitor cells from the adult mouse brain using neurosphere assay and sectioning technique

English Abstract

The adult mammalian subventricular zone (SVZ) contains a population of neural stem cells (NSCs) that give rise to neurons and glia. Owing to their rarity, and a paucity of NSC—specific markers, the neurospher assay (NSA) is a common and selective method for isolating and understanding the biology of embryonic and adult neural stem cells. This study aims at introducing an effective and appropriate technique for isolating of more neural stem and progenitor cells from the adult mouse brain using NSA. Two different methods were used in order to isolate and culture the SVZ of the lateral ventricles using NSA. In the first method the rostral part of the SVZ of the lateral ventricle was dissociated into single cell suspension and cultured using NSA. In the second method after cutting the rostral part of lateral ventricle into 400 µm serial sections, the SVZ was microdissected from all sections and cultured separately, using NSA. Primary neurospheres were counted seven days after plating; the mean numbers of neurospheres generated in two different methods were compared. The distribution and frequency of neurosphere forming cells (Neural stem and progenitor Cells) is not the same along the antero-posterior axis of the rostral part of the lateral ventricle. The mean number of neurospheres generated by sectioning method was much higher than the one generated using first method (P<0.0001).

Document Downloads