title

دست ورزی ژنتیکی سلول های بنیادی مزانشیمال با بیان موقت ژن حفاظت کننده سلولی HO-1

حبیبی رودکنار, مهریار ، امیری زاده, ناصر ، محمدزاده وردین, محمد ، حامدی اصل, پژمان (1400) دست ورزی ژنتیکی سلول های بنیادی مزانشیمال با بیان موقت ژن حفاظت کننده سلولی HO-1. کارشناسی ارشد (پایان نامه) موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون.

متن کامل


[img] متنی - گزارش نهایی طرح تحقیقاتی/ پایان نامه
محدود به فقط پرسنل سامانه

13MB

خلاصه فارسی

مقدمه: سلول های بنیادی مزانشیمال (MSCs) بعنوان یک منبع سلولی ایده آل برای پیوند بکار می روند زیرا بدست آوردن و تکثیر ex vivo آنها آسان می باشد. در طی آماده سازی MSCs ، آنها متحمل شرایط فقدان سرم و نبود اکسیژن می شوند. از طرف دیگر ، میزان بقاء سلولی بعد از پیوند کاهش می یابد ، برای مثال ، در سکته قلبی در طی روزهای نخستین پیوند تنها عملکرد نواحی حاشیه ای قلب بهبود می یابد. بنابراین ضروری است که مقاومت MSCs را در برابر شرایط سخت ریز محیط که به موجب ایسکمی ، نبود اکسیژن ، پاسخ های التهابی و فاکتورهای پروآپوپتوتیک ایجاد می شوند را افزایش دهیم تا بدین وسیله کارآیی درمان سلولی را بهبود دهیم. هدف: در این مطالعه ، بمنظور دستیابی به اهدافی که اشاره کردیم ما MSCs را به یک عامل سایتوپروتکتیو قوی مانند " هم اکسیژناز " ( HO-1 ) مجهز می کنیم. مواد و روش¬ها: به منظور القاء HO-1 ، MSCs را در معرض اشعه UV قرار دادیم. cDNA کامل HO-1 را بوسیله پرایمر هایش استخراج کردیم و به وکتور پروکاریوتی TOPO با استفاده از واکنش کلونینگ TOPO کلون کردیم. سپس بوسیله واکنش نوترکیبی LR وکتور ساخته شده را به وکتور بیانی آدنوویروس منطبق با سیستم Gateway متصل کردیم. ویروس نوترکیب در رده سلولی یوکاریوتی مناسب تولید می شود. ویروس نوترکیب بیان کننده HO-1 را به سلول های MSCs انتقال دادیم. سلول های که HO-1 را به آنها منتقل کردیم را بمنظور ارزیابی بقاء سلولی و آپوپتوز در معرض شرایط نبود اکسیژن و استرس های اکسیداتیو قرار دادیم. یافته¬ها: MSCs آلوده شده با آدنوویروس های نوترکیب بیان کننده HO-1 را بوسیله آنالیزهای RT-PCR و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار دادیم. بعد از مواجه با شرایط نبود اکسیژن و استرس های اکسیداتیو ، سلول های تغییر یافته بوسیله HO-1 در مقایسه با کنترل بقاء سلولی بیشتر و آپوپتوز کمتری داشتند. MSCs-HO-1 قدرت تمایزشان به رده های آدیپوسیت و اوستئوبلاست را حفظ کردند. نتیجه¬گیری: بیان موقت HO-1 در MSCs بقاء سلولی در برابر استرس ها که به ناچار MSCs با آنها مواجه می شوند را افزایش می دهد و ممکن است منجر به پیشبرد کارآیی درمان سلولی شود.

عنوان انگليسی

Genetic manipulation of MSC with transient expression of cytoprotection gene , HO-1

خلاصه انگلیسی

Introduction MSCs appear to be an appealing cell source for transplantation because of the ease of harvest and expansion ex vivo. During preparation of MSCs, They must undergo serum free and hypoxia conditions. On the other hand, the low cellular survival rate after transplantation, for example, into an infarcted heart within the first few days engenders only marginal functional improvement. Thus, it is necessary to reinforce MSCs against the arduous microenvironment incurred from ischemia, hypoxia, inflammatory response, and proapoptotic factors in order to improve the efficacy of cell therapy. Aim In this study, in order to fulfill the above goals we manipulate MSCs with one of the potent cytoprotective factor i.e Hemoxygenase (HO-1). Materials and Methods MSCs were exposed to UV irradiation in order to induce HO-1. Full length cDNA of HO-1cDNA was isolated with specific primers and was cloned into prokaryotic TOPO vector by TOPO cloning reaction.The construct was ligated to gateway adapted adenovirus expression vector by LR recombination reaction. The Recombinant virus produced in appropriate mammalian cell line. The recombinant virus expressing HO-1 infected to MSCs. HO-1 engineered cells were exposed to hypoxic and oxidative stress condition followed by cell viability and apoptosis. Results MSCs infected with recombinant adenovirus expressing HO-1 as determined by RT-PCR and western Blot analysis. After exposure to hypoxia and oxidative stress condition cell viability and apoptosis were higher and lower in HO-1 engineered cells compared to the control. MSCs-HO-1 retain their multidifferentiation potential into adipogenic and oesteogenic lineages. Conclusion Transient expression of HO-1 in MSCs increase cell viability against stresses that MSCs inevitably faced to them and may lead to improve the efficacy of cell therapy.

نوع سند :پایان نامه (کارشناسی ارشد )
زبان سند : فارسی
استاد راهنما :مهریار حبیبی رودکنار
استاد مشاور :ناصر امیری زاده
استاد مشاور :محمد محمدزاده وردین
دانشجو :پژمان حامدی اصل
کلیدواژه ها (فارسی):MSC ، HO-1 ، استرس اکسیداتیو ، فقدان اکسیژن ، آپوپتوز ، آدنوویروس نوترکیب.
کلیدواژه ها (انگلیسی):MSC, HO-1, oxidative stress, hypoxia, apoptosis, recombinant adenovirus
موضوعات :WH سیستم های خونی و لنغاوی
بخش های دانشگاهی :دانشكده پزشكي > گروه علوم پایه > بخش علوم تشريح
کد شناسایی :14585
ارائه شده توسط : دکتر محمد محمدزاده
ارائه شده در تاریخ :19 مرداد 1400 11:12
آخرین تغییر :19 مرداد 1400 11:12

فقط پرسنل کتابخانه صفحه کنترل اسناد

Document Downloads

More statistics for this item...