مقایسه پرایمرهای B4/B5 و F4/R2 برای ردیابی DNA بروسلا در سرم با روش PCR

Persian Abstract

بروسلوز يکي از شايعترين بيماري هاي مشترک بين انسان ودام بودهدر تمام مناطق ایران آندميک است. ابداع تكنيك هاي جديد تشخيصي كه از يك طرف منجر به رديابي و شناسائي سريع باکتری و از طرف ديگرخطر عفونت بروسلا را در آزمايشگاه به حداقل برساند از اهميت بالائي برخوردار است. هدف این مطالعه، ارزیابی دو متد متفاوت PCRبرای ردیابی DNAگونه های بروسلا در نمونه های سرم انسان بود. روش ها: رقت های مختلفی از DNAخالص آماده شد. دوجفت پرایمر مورد استفاده نواحی مختلفی از ژن های بروسلا آبورتوس را تکثیر می کنند. تمام واکنش های PCR در حجم کلی 25 میکرولیتر که حاوی غلظت های متفاوتی از DNAبروسلا و همچنین کنترل مثبت ومنفی بودند، انجام شد. یافته ها: دو متد PCR حساسیت بسیار خوبی برای ردیابی DNA گونه های بروسلا در نمونه های سرم داشتند.دو جفت پرایمر مورد استفاده تفاوتی در حساسیت برای ردیابی DNAخالص بروسلانشان ندادند، آنها توانستند DNAخالص بروسلا را در محدودهای بین25/4 نانو گرم تا 25/4 فمتو گرم را ردیابی نمایند. نتیجه گیری: در مقایسه بین دو جفت پرایمر، از آنجائیکه پرایمر B4/B5موجب تکثیر قطعه کوتاهتری می شودو ردیابی و کار کردن با قطعه کوتاهتر راحت است ، این پرایمر به ابزاری برای تشخیص بروسلوز انسان مبدل گردد.

Title

Comparison of primers B4/B5 and F4/R2 for Detection of Brucella DNA in Serum by PCR

English Abstract

Introduction: Brucellosis is a worldwide zoonosis and is endemic in all parts of the Iran. The development of new diagnostic techniques that facilitate rapid detection and identification of brucellae and minimize the risk of laboratory infection is of great practical importance. The aim of this study was to evaluate two different PCR methods for the detection of Brucella spp. DNA in human serum samples. Methods: Serial dilutions of purified DNA were made. The two pairs of primers have chosen amplified regions of two different Brucella genes. All amplifications were performed in a total volume of 25 μl, containing serial dilutions of Brucella DNA and positive and negative controls. The negative control contained sterile water instead of DNA template. As positive controls, DNA isolated from Brucella spp was used. Results: The two PCR assays had excellent sensitivity for detection of Brucella spp DNA in serum samples. The two primers assayed did not show a difference in sensitivity for detecting purified Brucella DNA. They detecting purified DNA of Brucella in ranging between 4/25 ng to 4/25 fg. Conclusion: The sensitivity of two primers set did not show a difference in detecting of Brucella DNA in serum sample; however, as the primers B4/B5 amplified a shorter fragment in comparison to primers F4/R2, we think that they could provide a useful tool for diagnosis of human brucellosis.

Document Downloads