بررسی اثر جایگزینی microRNA تنظیم کننده‌ مهاجرت و آپوپتوز و تغییر بیان ژن PD-L1 در رده‌ی سلولی سرطان معده (AGS-MKN45)

خلاصه فارسی

در بین سرطان‌ها سرطان معده یکی از علل عمده‌ی مرگ ناشی از سرطان می‌باشد که حدود 50 درصد از کل سرطان‌های گوارشی را در برمی‌گیرد. تغییرات بیان ژن‌ها در انواع سرطان‌ها از جمله سرطان معده ، سینه ، کلون ، پروستات و ... مشاهده شده است. بسیاری از ژن‌های مؤثر در تکوین سرطان توسط microRNA ها تنظیم می‌شوند. miRNA هادر میان انواع چک پوینت‌های ایمنی CTLA-4 و PD-1/PD-L1 و ... از نظر مهار کنندگی بهترین اثر درمانی را دارند. مطالعات نشان می دهد بیانa 320- microRNAدر سرطان معده کاهش می‌یابد. هدف: هدف از این مطالعه بررسی تغییر بیان a320-microRNA پس از جایگزینی در رده‌ی سلولی سرطان معده (AGS-MKN45) وتاثیر آن بر مهار رشد و مهاجرت این سلول‌ها و کاهش بیان ژن PDL-1 می‌باشد. مواد و روش‌ها: طی این مطالعه سلول‌های سرطانی معده رده ی (AGS-MKN45) در محیط کشت RPMI1640 کشت داده شدند و در انکوباتور با دمای 37 درجه و رطوبت 95% و5% دی اکسید کربن انکوبه شدند. با استفاده ازروش الکتروپوریشن microRNA-320a به داخل سلول‌های سرطانی ترنسفکت شدو برای بررسی افزایش بیان ژنa 320-microRNA و همچنین تأثیر بر تغییر بیان ژن‌های مورد هدف در سلول‌های سرطانی از تست RT-PCR استفاده شدو به دنبال نتایج حاصل از تست RT-PCR برای بررسی مهار تکثیر سلول‌های سرطانی از تست MTTاستفاده شدو سپس برای بررسی میزان آپوپتوز القا شده در سلول‌های سرطانی از تست Flow Cytometry استفاده کردیم و در نهایت برای بررسی مهاجرت سلول‌های سرطانی ازتستWound healing assay استفاده شد. نتایج: نتایج آزمون های انجام شده نشان دهنده ی افزایش معنی دار ژن a320-microRNA و کاهش ژن PD-L1 در هر سه رده ی سلولی به دنبال ترنسفکت a320-microRNA در مقایسه با گروه کنترل بود. نتایج حاصل از تست MTT مهار رشد وتکثیر را در سلول‌های سرطانی را نشان دادو نتایج تستFlow Cytometry افزایش آپوپتوز را در سلول‌های سرطانی نشان داد و در نهایت نتایج تست Wound healing assayکاهش مهاجرت سلولی را در سلول‌های سرطانی را نشان داد . نتیجه‌گیری:با توجه به اینکه نتایج آزمون‌ها نشان دادند افزایش a320-microRNA باعث کاهش بیان ژن‌های دخیل در مهاجرت سلولی و به دنبال آن باعث مهار مهاجرت سلولی و افزایش مرگ سلولی سلول‌های سرطانی (AGS-MKN45)می‌شود، لذا میتوان افزایش سطح بیان a320-microRNA و کاهش ژن PD-L1 را در بیماران مبتلا به سرطان معده به عنوان یک گزینه ی کاربردی جهت بررسی ها و مطالعات بیشتر مورد توجه قرار داد

عنوان انگليسی

Investigating the effect of replacing microRNA regulating migration and apoptosis and changing PD-L1 gene expression in gastric cancer cell line (AGS-MKN45)

خلاصه انگلیسی

Background: Gastric cancer is one of the main causes of cancer related death, which includes about 50% of all gastrointestinal cancers. Changes in gene expression have been observed in all types of cancers, including stomach, breast, colon, prostate, etc. Many genes effective in cancer development are regulated by microRNAs. Among the types of immune checkpoints, miRNAs have the best therapeutic effect in terms of inhibition of CTLA-4 and PD-1/PDL-1, etc. Studies show that the expression of miR-320a decreases in gastric cancer. The purpose of this study is to investigate the change in expression of miR-320a after replacement in gastric cancer cell line (AGS-MKN45-KATOIII) and its effect on inhibiting the growth and migration of these cells and reducing the expression of PDL-1 gene. Aim: The aim of this study is to investigate the change in the expression of a320-microRNA after replacement in the gastric cancer cell line (AGS-MKN45) and its effect on inhibiting the growth and migration of these cells and reducing the expression of the PDL-1 gene. Materials and methods: The gastric cancer (AGS-MKN45-KATOIII) cell line were cultured in an incubator at (37C with moisture 95% and 5% Co2) using RPMI-1640 culture medium with 10% FBS . Using miR-320a electroporation method It was transfected into cancer cells. The RT-PCR test was used to investigate the increase in the expression of the miR-320a gene and also the effect on the change in the expression of target genes in cancer cells. The MTT test was used to investigate the inhibition of the proliferation of cancer cells. The Wound test was used to investigate the migration of cancer cells. healing assay was used. Flow Cytometry test was used to check the amount of apoptosis induced in cancer cells. Results: The result of the qRT-PCR test showed a significant increase in the miR-320a gene and a decrease in the PD-L1 gene in all three cell lines following the miR-320a transfection compared to the control group. The results of MTT test showed inhibition of growth and proliferation in cancer cells. Wound healing assay test results showed a decrease in cell migration in cancer cells. Flow Cytometry test results showed an increase in apoptosis in cancer cells. Conclusion: The result showed that increasing at miR-320a expression level has an important role in the reduction of growth and migration at gastric cancer cell line (AGS-MKN45-KATOIII)

Document Downloads