اندازه گيري سطح داخل لنفوسيتي اسيد آسکوربيک با استفاده از روش کروماتوگرافي فاز مايع با کارکرد عالي (HPLC) به عنوان مارکر استرس اکسيداتيو درون سلولي و مقايسه آن با سطوح پلاسمائي

خلاصه فارسی

مقدمه : هدف : ويتامين C نقش مهمي را در فرايند هاي متابوليک مانند ساختار کلاژن و جلوگيري از خونريزي بازي ميکند. اين ماده به عنوان يکي از مهمترين اجزاي استرس اکسيداتيو داخل سلولي است. هر چند که امروزه آسکوروي آشکار کمتر ديده مي شود ولي شواهدي وجود دارد که کمبود ساب کلنيکي ويتاميين C کاملا شايع است.اندازه گيري سطح سرمي و پلاسمايي ويتامين C به درستي با سطح داخل بافتي آن ارتباط ندارد در حاليکه سطوح ويتامين داخل لنفوسيتي بيانگر دقيق تري از وضعيت ذخير ه اي ويتامين C ميباشد که به طور حاد تحت تاثير تغييرات چرخه شبانه روزي و تغذيه اي قرار نمي گيرد. هدف اين مطالعه راه اندازي روش کروماتوگرافي فاز مايع با کارکرد عالي (HPLC) جهت اندازه گيري سطح ويتامين C داخل لنفوسيت مي باشد. روش تحقيق : سيستم کروماتوگرافي فاز مايع با کارکرد عالي (HPLC) مجهز به آشکارساز ماوراء بنفش براي تفکيک و شناسايي اسکوربيک اسيد استفاده شد. طول موج آشکارسازي 245 نانومتر و ستون کروماتوگرافي از نوع C18 بود. فاز متحرک بافر فسفات شامل 0.2 مول KH2PO4 و 2 ميلي مول ٍEDTA بود که در pH=3 تثبيت شده بود. سطوح ويتامين C داخل لنفوسيت و پلاسما در 10 داوطلب سالم اندازه گيري شد. نتايج : منحني کاليبراسيون اندازه گيري ويتامين c داخل لنفوسيتي و پلاسمايي با استفاده از HPLC در غلظت هاي يک تا 50 ميکروگرم پلاسما يا در سوسپانسيون سلولي(108 لنفوسيت در هر ميلي ليتر) خطي بود. ضريب همبستگي 9997/0 R2= را نشان داد. دقت روش براي تغييرات درون روزي و بين روزي کمتر از 10 درصد بود صحت روش در محدوده 90 تا 120 درصد بود. . ميانگين غلظت ويتامين C در پلاسما (ميکرو گرم/108 سلول) 30/4 با انحراف معيار (ميکرو گرم/108 سلول) 7/1 مي باشد در حاليکه ميانگين غلظت ويتامينC در لنفوسيت (ميکرو گرم/108 سلول) 00/14 با انحراف معيار (ميکرو گرم/108 سلول) 7/3 مي باشد. نتيجه گيري : روش HPLC يک تکنيک قابل استفاده و موثر در تعيين سطح ويتامين C داخل سلولي است. روش حاضر امکان بررسي ارتباط بين بيمارهاي مختلف و سطوح داخل سلولي اسيد اسکوربيک را فراهم مي کند.

عنوان انگليسی

Measurement of intracellular levels of vitamin C in human lymphocytes by high performance liquid chromatography [HPLC] as intra cellular oxidative marker : A comparison to plasma levels

خلاصه انگلیسی

Introduction: Vitamin C plays an active role in many important metabolic processes, such as collagen formation and the prevention of bleeding. Although overt scurvy is now rare, there is evidence that sub clinical vitamin C deficiency is still quite common. Serum and plasma vitamin C measurements do not correlate well with tissue levels while lymphocyte vitamin C levels provide the most accurate assessment of the true status of vitamin C stores and are not affected acutely by circadian rhythm or dietary changes. The goal of this study is set up of reverse phase high performance liquid chromatographic method (HPLC) for the quantification of intra cellular vitamin C concentration. Material & Methods: Reverse phase HPLC with a UV detection system for determination of vitamin C was used. Detector wave height was 245nm and analytic chromatographic column was C18. The mobile phase of phosphate buffer was included of: .2 mol KH2PO4 and .2 mol EDTA was stabilized in Ph=3. Plasma and Inter lymphocyte vitamin C levels were identified in 10 healthy people. Results: Calibration curve for quantification of intra lymphocyte and plasma vitamin C in 1-50 µg/plasma or cellular suspension (108 lymphocytes /ml) was linear. Correlation coefficient was 0.9997. Precision of study for intra/within assay was less than 10%. Plasma vitamin C concentration was 4.3 µg/108 cells with SD=1.7 µg/108 cells while lymphocyte vitamin C concentration was 14.00 µg/108 cells with SD=3.7 µg/108 cells. Conclusions: The proposed HPLC method offers a reliable and reproducible technique for the quantification of intracellular vitamin C. This method prepared survey of correlation of different diseases and intracellular vitamin C levels.

Document Downloads