تخلیص آنزیم آمین اکسیداز از جوانه های نخود و بررسی اثر اسمولیت سوکروز بر پایداری آن

Persian Abstract

مقدمه: آمین اکسیدازهای مس دار آنزیم هایی (E.C 1.4.3.6) هستند که در همه موجودات زنده اعم از باکتریها، گیاهان و پستانداران یافت می شوند. این آنزیم ها به خاطر شرکت در متابولیسم پلی آمین ها و بسیاری از فرآیندهای فیزیوپاتولوژیکی مورد توجه قرار گرفته اند. اسمولیت ها مواد افزودنی محلولی هستند که به شکل مناسبی باعث پایداری پروتئین در مقابل استرس های شدید محیطی می شوند بدون اینکه هیچگونه اثر کاهنده بر فعالیت آنزیمی داشته باشند. مواد و روشها: آمین اکسیداز ازجوانه های نخود تخلیص شد. فعالیت باقیمانده آنزیم آمین اکسیداز جوانه نخود(PSAO)، در غلظت های مختلف سوکروز با انکوباسیون در دماهای مختلف بررسی شد. سپس برای بررسی بیشتر اثر سوکروز، مطالعات به وسیله دورنگ نمایی دورانی در ناحیه ماوراء بنفش دور، اسپکتروسکوپی فلورسانس و کالریمتری روبشی (DSC) انجام شد. نتایج : آمین اکسیداز جوانه نخود، فعالیت خود را بعد از 60 دقیقه انکوباسیون در 63°C از دست داد. حضور سوکروز بر حسب کاهش غیر فعالسازی گرمایی باعث افزایش پایداری آمین اکسیداز می شود. مطالعات بیشتر با اسپکتروسکوپی فلورسانس، دورنگ نمایی دورانی و DSC نشان دادند که سوکروزباعث افزایش پایداری آمین اکسیداز جوانه نخود می شود و این پایداری وابسته به غلظت سوکروز است. تمام نتایج به دست آمده از تکنیک های مختلف با نتایج غیرفعالسازی گرمایی مطابقت دارد. آنالیز ترموگرام DSC نشان داد که واسرشتگی آمین اکسیداز جوانه نخود در حضور وعدم حضور سوکروز یک فرآیند برگشت ناپذیر است که از یک مدل دو حالته پیروی می کند. بر پایه این مدل، سوکروز پارامترهای T* و آنتالپی کالریمتری را افزایش می دهد در حالی که آنتالپی و آنتروپی واسرشتگی کاهش می یابد

Title

Puriffication of amine oxidase from pea seedlings and study on the effect of sucrose on its stability

English Abstract

Introduction: The copper amine oxidases (AO, E.C.1.4.3.6) is found in all known organisms including plants, mamals, and microorganism. There is an increasing interest in amine oxidases due to their involvement in polyamine metabolism correlated in physiopathological processes. Osmolytes as solvent additives favorably affect protein stability and solubility. These additives can increase stability of protein against extreme environmental stress without any decrement in enzymatic activity. Methods: Amine oxidase was purified from pea seedlings. Residual activity of pea seedling amine oxidase (PSAO) were investigated as a function of n various sucrose concentration and incubation time in different temperatures. Then for more elucidation of the effect of sucrose the studies were extended using by far-UV CD, fluorescence spectroscopy and differential scanning calorimetry (DSC). Results: PSAO loses its activity by incubation in 63°C for 60 min. Presence of sucrose increases the stability of PSAO in terms of activity losing temperature and incubation time. More detailed studies using fluorescence spectroscopy, far uv-CD and DSC showed that sucrose increases the PSAO stability as a concentration dependent manner. Results from different techniques are in agreement with those from thermal inactivation. Analysis of DSC thermogram indicates that PSAO unfolding in the presence and absence of sucrose is an irreversible process which follows Two-State model. Based on this model, sucrose increases the T*, calorimetric enthalpy while decreases the unfolding enthalpy and entropy.

Document Downloads