بررسی کارائی سه روش مختلف استخراج DNA بروسلا در نمونه هاي سرم انسان

Persian Abstract

زمينه و هدف: بروسلوز انسانی در بسیاری از کشورهای جهان از جمله ایران، یک مشکل اساسی بهداشت جامعه می باشد. ابداع روش های جدید تشخیصی که دارای حساسیت بالائی بوده و خطر عفونت در پرسنل آزمایشگاه را به حد اقل برساند، از اهمیت زیادی برخوردارمی باشد. از جمله روش هائی که این مزایارادارد، واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR))است. با وجود این کارائی PCR تا حد زیادی به روش های استخراج DNA وابسته می باشد. ما در این مطالعه، کارائی سه روش مختلف استخراج DNA باکتری بروسلا در سرم را مورد بررسی قرار دادیم. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، ابتدا از باكتري بروسلاي سوسپانسيون ميكروبي درسرم فيزيولوژي تهيه گرديد كه معادل كدورت نیم مك فارلندبود. نمونه های سرم انسان بطور مصنوعی با غلظت های مشخصی از باکتری بروسلا تلقیح شدند. با سه روش متفاوتDNA استخراج شد و با PCRاختصاصی جنس بروسلا مورد آزمایش قرار گرفت. یافته ها: یافته های ما نشان داد که پروتکل کیت سیناژن در مقایسه با دو روش دیگر در رقت های پایین تری از DNA بروسلا قادر به ردیابی DNA این باکتری در سرم می باشد. کیت سیناژن توانست DNA باکتری را در رقت ده برابر کمتر در مقایسه با دو روش دیگر ردیابی نماید. نتيجه گيري: با توجه به نتایج حاصل از این مطالعه کیت سیناژن روش ارجح در استخراج بوده و دارای حساسیت بهتر برای جداسازی DNA بروسلا از نمونه های سرم می باشد.

Title

Evaluation of three DNA extraction methods for detection of brucella DNA in human serum samples

English Abstract

Background: Human Brucellosis is a significant public health problem in many countries including Iran. The development of new diagnostic techniques, with high sensitivity and minimizes risk of laboratory infection, have of great importance. PCR is one of the procedures, which have these advantages. However, PCR efficiency is largely dependent on DNA extraction methods. In this study, we were studied the efficiency of three different extraction methods of Brucella DNA in serum samples. Materials & Methods: In this experimental study, initially, microbial suspensions were prepared in saline that its turbidity was equivalent to o.5 McFarland. Human serum samples were spiked with known concentration of Brucella Melitensis. The DNA was extracted by three methods and tested by a genus-specific PCR Method. Results: Our results showed that the cinneagen kit protocol, compare with others protocols, detected Brucella DNA in lower serum concentration. Cinnagen kite could detect Brucella DNA in ten-fold dilution than two other methods. Conclusion: According to the study, the cinnagen kit was the preferred assay that yields the best sensitivity for isolation of brucella DNA for serum samples.

Document Downloads