بررسی آثار حفاظتی آنتی‎بادی‎های ضد فلاژلی سودوموناس آئروژینوزا بر عفونت سوختگی ناشی از آن در موش‎های BALB/c

Persian Abstract

هدف: سودوموناس آئروژینوزا به‏عنوان یکی از مهم‏ترین عوامل عفونت زخم و سپتی‏سمی در بیماران سوخته محسوب می‏شود. توسعه ایمنی‏درمانی به‏عنوان یکی از راه‏کارهای عملی برای مقابله با این باکتری محسوب می‏شود. فلاژل به‏عنوان یکی از مهم‏ترین عوامل بیماری‏زایی باکتری، نقش مهمی در اتصال، حرکت، کموتاکسی و تحریک پاسخ ایمنی با واسطه TLR5 دارد و از این رو به‏عنوان کاندید واکسن مطرح است. تهیه آنتی‏بادی ضد فلاژلین و بررسی آثار حفاظتی آن در مدل موش سوخته هدف اصلی این مطالعه است. مواد و روش‏ها: در مرحله اول آنتی‏ژن‏های فلاژلی توسط اولتراسانتریفوژ تهیه شد. آنتی‏بادی‏های ضد فلاژلی در خرگوش تولید و ناخالصی‏های آن توسط پدیده جذب جدا شد. اختصاصی بودن آنتی‏بادی‏های به‏دست آمده برای آنتی‏ژن‏های فلاژلی توسط آزمون‏های آگلوتیناسیون بررسی شد. پس از تعیین حداقل دوز کشندگی (LD50) از سویه مد نظر، رقت‏های متفاوتی از آنتی‏سرم ضد فلاژلی برای انجام ایمنی‏زایی غیرفعال در موش‏های سوخته تزریق شد. میزان انتشار و پخش باکتری از محل سوختگی با بررسی کمّی تعداد باکتری‏ها در پوست و کبد تعیین شد. در این تحقیق علاوه بر سویه ATCC 27853 سودوموناس آئروژینوزا، سویه PA103 و یک ایزوله بالینی نیز برای آزمایش‏های آگلوتیناسیون استفاده شد. نتایج: آنتی‏سرم H توانست در 80 درصد موارد جلوی مرگ و میر موش‏های سوخته شده و چالش شده با سویه ATCC 27853 را بگیرد. همچنین شمارش تعداد باکتری‏های موجود در بافت کبد و پوست نشان داد که تعداد باکتری‏ها در بافت‏های موش‏های تحت آزمایش در مقایسه با گروه کنترل به‏صورت معنی‏دار کمتر است. نتیجه‏گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که آنتی‏بادی‏های ضد فلاژلی سودوموناس با مهار تهاجم باکتری و اوپسونیزه کردن آن می‏توانند در برابر عفونت ناشی از زخم سوختگی اثر حفاظتی داشته باشد.

Title

Investigation of protective effects of Pseudomonas aeruginosa anti-flagellar antibodies in burned-induced infection on BALB/c mice

English Abstract

Objective: Pseudomonas aeruginosa is the major cause of septicemia and wound infection in burned patients. Immunotraphy is the best practical way for prevention and treatment of these infections. Flagella as one of the most important bacterial virulence factors has important role in attachment, motility, chemotaxis and TLR-5-dependent immune response so that it propounded as a vaccine candidate. Production of anti-flagellar antibodies and evaluation of its protective effects in burned induced infection of mice was the main aim of this study. Materials and Methods: In the first step, flagellar antigen prepared by ultra-centrifugation. Anti-flagellar antibodies produced in rabbit and its impurity separated by absorption technique. Specification of the obtained antibodies for flagellar antigen was investigated via agglutination test. After determination of LD50 in a known strain, different dilutions of anti-flagellar antibodies injected in burned mice for passive immunization. The rate of bacterial spread from burn site was determined by quantification assay of bacteria in skin and liver. In this study, clinical isolate and PA103 in addition to ATCC 27853 strain were used for agglutination test. Results: H-antiserum reduced mortality of burned mice challenged with ATCC 27853 strains about 80%. Counting of bacteria in the skin and liver showed that the number of bacteria in immunized mice, in contrast with control group, was significantly low. Conclusion: The results of this study showed that anti-flagellar antibodies of Pseudomonas can inhibit invasion of Pseudomonas and facilitate its opsonization, so these antibodies have protective effects in burned wound infections.

Document Downloads