بررسی تأثیر انجماد شیشه ای بر میزان بیان ژنهای EGF و EGFR در جنین های مرحله دو سلولی و بلاستوسیستِ موش سوری

Persian Abstract

هدف : امروزه انجماد شيشه اي به منظور حفظ جنين هاي اضافي در ART ، در حال تبديل شدن به یک روش رايج است، اما تأثيرات ژنتيکي اين روش مورد ابهام است. هنوز مشخص نيست كه جنين هاي ذوب شده اي كه به لحاظ مورفولوژي طبيعي هستند، ا زنظر ژنتيکي هم طبيعي باشند. دراين مطالعه اثر انجماد شيشه اي با كرايوتاپ بر بیان ژن EGF و EGFR در جنین های دو سلولی وبلاستوسیست موش سوری، مورد بررسي قرارگرفته است. روش ها: جنين هاي دو سلولي 46 - 44 ساعت وبلاستوسیستها 86 - 88 ساعت پس از تزریق HCG از موشهای تحریک تخمک گذاری شده جمع آوري شد و به دو گروه كنترل و آزمون تقسیم شدند. جنينهاي دوسلولي وبلاستوسیست گروه کنترل برای انجام ازمایشات بعدی بلافاصله در تانک نیتروژن ذخیره شدند .جنينهاي دوسلولي و بلاستوسیست گروه آزمون با روش انجماد شيشه اي با استفاده از كرايوتاپ ، منجمد و پس از دو تا چهار ماه ذوب شدند. دوسلولي هايي كه ا زنظر مورفولوژي طبيعي بودند، انتخاب و RNA ي آ نها استخراج شد. براي بررسي بيان كمّي ژنهای EGF و EGFR روش Real-time-PCR برای هر دو گروه مورداستفاده قرارگرفت. نتایج با کمک نرم افزار SPSS 13 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. يافته ها: نتايج حاصل از آناليز كمّي Real-time-PCR نشا ن داد كه سطح بيان ژنهای EGF و EGFR در گروه آزمون نسبت به گروه كنترل كاهش یافته است. نتيجه گيري: اين مطالعه نشا ن داد كه روش انجماد شيشه اي با كرايوتاپ اثري منفي بر میزان بيان ژنهای EGF و EGFR در اين جنينها دارد.

Title

Assessment of EGF gene and EGF-R expression following Vitrification of 2-cell and blastocysts mouse embryos

English Abstract

Purpose: Nowadays, vitrification is used for the protection of surplus embryos in ART, but genetic effects of this method are unclear. However, it is not appear that thawed embryos that they are morphologically normal, also be genetically normal. This study was designed in order to evaluate of cryopreservation effect on expression of EGF and EGFR genes in mouse 2-cells and blastocysts. Methods:To stimulate ovulation in mice, HCG was injected. After 44-46 and 86-88 hours,2-cells and blastocysts were collected, respectively. These embryos were divided into case and control groups. 2-cells and blastocysts of control group were immediately stored in nitrogen tank for future studies. 2-cells and blastocysts of case group were cryopreserved by using cryotop and after 2-4 mounts were thawed. 2-cells which were normal based on their morphology were selected and extraction of their RNA were performed. Quantitative expression of EGF and EGFR genes in both groups was investigated by using Real time PCR. Statistical analyses were performed by SPSS (version 13). Findings:The results of Real time PCR quantitative analysis showed that expression level of EGF and EGFR genes has diminished in case group comparing to control group. Result: This study showed that cryopreservation by cryotop has negative effect on EGF and EGFR genes expression in the embryos.

Document Downloads