جداسازی و کشت اولیه سلولهای ستیغ عصبی جنین جوجه

Persian Abstract

سابقه و هدف: دسترسی به سلولهای ستیغ عصبی در محیط آزمایشگاهی می تواند مدلی برای بررسی نحوه مهاجرت و تمایز این سلولها در محیطIn Vivo باشد.همچنین فرصتی فراهم می کند تا تعاملات سلولی و نحوه تاثیر ترکیبات دارویی و مورفوژنی را در آن بهتر بررسی کنیم. لذا در این بررسی برآنیم تا با توجه به در دسترس بودن وآسانی جداسازی بافت های جنین جوجه و مناسب بودن آن برای بررسی فرآیندهای تکوینی از این مدل آزمایشگاهی برای جداسازی و تعیین خصوصیت سلول های ستیغ عصبی استفاده کنیم. مواد و روش: تخم مرغ های نطفه دار حدود 40ساعت در دمای 38درجه و رطوبت نسبی 55-60 درصد در داخل انکوباتور قرار داده شدند تا جنین ها به مرحله 12-14بر طبق جدول تکاملی Hamburger-Hamilton برسند. سپس جنین های روی سطح زرده تخم مرغ جداسازی شده و بخش لوله عصبی از آنها جدا شد. سپس این لوله عصبی به مدت 24 ساعت کشت داده شد تا سلولهای ستیغ عصبی را آزاد کند. پس از 24 ساعت لوله عصبی از محیط کشت جدا شد و سلولهای ستیغ عصبی موجود در کف ظروف کشت به مدت 5 روز کشت داده شدند تا تکثیر یابند. سپس سلولها جمع آوری شده به داخل محلول ترایزول انتقال یافتند و پس از استخراجTotal RNA سنتز cDNA صورت گرفت و با انجام PCR تکثیر ژن های موردنظر با استفاده از پرایمرهای اختصاصی بررسی شد. نتایج:نتایج ما نشان داد که لوله عصبی قادر به آزاد سازی سلولهای ستیغ عصبی در محیط کشت می باشد که با تعدیل این محیط کشت سلولها تواتایی تکثیر در محیط آزمایشگاهی را دارند.همچنین سلولهای ستیغ عصبی نشانگر های نشان دهنده هویت این سلولها از جمله Sox9,Sox10,Slug را بیان کردند که از طریق RT-PCRبیان ژن های ذکرشده اثبات شد. نتیجه گیری:لوله عصبی توانایی آزادسازی سلولهای ستیغ عصبی را دارند و در صورت وجود محیط کشت غنی سلولهای ذکرشده قابلیت تکثیر در محیط را خواهند داشت.

Title

Isolation and primary culture of chick embryonic neural crest cells

English Abstract

Objective and Aim In vitro access to the neural crest cell(NCS) can make a model for studing migration and differentiation of these cells.It also provides an opportunity to better understanding of the cell-cell interaction,drug and morphogen effects on them.With respecting to accessibility and easily isolation of chick embryonic tissues and also their appropriation for studing the developmental processes,we aimed at isolating and characterizing the neural crest cells. Methods The hen' s fertilized eggs were incubated for about 40h at 38° c and 55-60% humidity until the embryos reached to stages 12-14 according to Hamburger-hamilton developmental stage table.Then the embryos were removed from egg' s yolk and the neural was isolated and cultured for 24 h in tissue culture dish to release neural crest cell.Then after,the neural tube was removed and allowed to Ncc to expand for further 5 days.Finally the cells were collected and subjected to PCR to study their gene expression profile. Result The neural tube released Ncc and these cells proliferated in culture condition.They also expressed markers including slug,sox9,sox10 by RT-PCR method. Conclusion The neural tube can release NCC in culture condition and these cells can proliferated in presence an appropriate medium.

Document Downloads