دورگه سازی در محل بر روی جنین جوجه

این آخرین ویرایش عنوان است.

خلاصه فارسی

سابقه و هدف: تکنیک دورگه سازی در محل، بر روی جنین (wmISH) یکی از ابزار های قدرتمند در بررسی جایگاه بیان رونوشت ژن در بافت های جنینی است. این مطالعه با هدف راه اندازی این تکنیک با استفاده از کاوش گر ضد الگوی آنزیم RALDH2 که با دیگوکسی ژنین نشاندار شده بود انجام شد. مواد و روش ها: پس از جداسازی جنین جوجه در مراحل ابتدایی تکوین، آن ها فیکس و آبگیری شدند و پس از بی رنگ شدن و تاثیر پروتئین کیناز K بر آن ها ابتدا محلول دورگه سازی و بعد محلول دورگه سازی حاوی کاوش گر ضد الگوی آنزیم RALDH2 به مدت 36 ساعت بر آن ها تاثیر داده شد. در نهایت پس از شستشو با محلول SSC و انکوبه شدن با آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین به آن ها محلول NBT/BCIP افزوده شد و جنین ها به محیط بافری NTMT منتقل شدند. به دسته از جنین ها کاوش گر الگوی این آنزیم اضافه شد و به جنین های کنترل منفی نیز هیچ گونه کاوش گری افزوده نشد. یافته ها: پس از گذشت 36 ساعت به دنبال اتصال کاوش گر ضد الگوی آنزیم RALDH2 به رونوشت های این آنزیم در سومایت های جنینی و نیز لوله های عصبی و قلبی جنین جایگاه حضور این رونوشت ها در بافت های مذکور به رنگ آبی مشاهده شدند. در گروه هایی که کاوش گر الگو اضافه شده بود و نیز گروه کنترل منفی سومایت ها و بافت عصبی رنگ نگرفته بودند.نتیجه گیری: با استفاده از تکنیک wmISH می توان ارزیابی دقیقی از مکان و میزان بیان رونوشت ژن ها در جنین به دست آورد.

عنوان انگليسی

whole mount In Situ Hybridization in Chick Embryo

خلاصه انگلیسی

Aim & Background: whole-mount in situ hybridization (wmISH) is a powerful tool to visualize the gene transcript in embryonic tissue. This study aimed at setting up wmISH using digoxygenine-labled RALDH2 antisense riboprobe. Methods & Materials: The early developing chick embryos were fixed and dehydrated upon dissecting. Following bleaching and protein kinase K treatment, the embryos were hybridized with hybridization buffer and then with the buffer containing RALDH2 antisense riboprobe for 36h. Upon washing with SSC solution and incubation with anti-digoxygenin Ab, the embryos were treated with NBT/BCIP and transferred to NTMT buffer. Some embryos received sense ribobrobe and negative control was considered as a group not treated with any riboprobes. Results: Following binding the antisense riboprobe to RALDH2 transcript, blue color appeared in somites and neural tube as well as the cardiac tube. No color was detected in the embryonic tissue treated with the sense riboprobe or in untreated group.

ویرایش های موجود این سند

• دورگه سازی در محل بر روی جنین جوجه. (deposited 10 اسفند 1394 05:43) [Currently Displayed]

Document Downloads