تأثیر آنتی ژن های توموری حاوی پروتئین های شوک حرارتی در حضور اگزوزوم های سلول های بنیادی مزانشیمال نوع 1 بر میزان سلول کشی لنفوسیت های T تحریک شده با سلول های دندریتیک

Persian Abstract

مقدمه: ایمونوتراپی سرطان یک روش درمانی امیدوارکننده برای فعال کردن سیستم ایمنی علیه سلول های توموری می باشد. مطالعات اخیر نشان می دهد که کمپلکس پروتئین شوک حرارتی-آنتی ژن در هدایت و عرضه آنتی ژن ها از طریق MHC class I و القاء پاسخ های سلول های TCD8+ نقش مهمی دارند. از آنجاییکه شواهد مطالعاتی اخیر بیانگر این است که سلول های بنیادی مزانشیمال تحریک شده با TLR-4 فاکتورهای پیش التهابی آزاد می کنند و میکرووزیکل های (MVs) مشتق از MSC، در مقایسه با خود MSC، علاوه بر ایجاد سیگنال های قوی، با ثبات تر بوده و با گذشت زمان عملکرد خود را از دست نمی دهند، در این مطالعه بر آن شدیم از سلول های دندریتیک حاصل از منوسیت های خون محیطی برای تحریک لنفوسیت های T در حضور MV های مشتق از MSC1 در سرطان گلیال رت بطور In vitro استفاده کنیم. روش ها: رده توموری B92 کشت و به مدت 90 دقیقه برای تهیه عصاره توموری در بن ماری 43⁰C قرار گرفت. در مرحله بعد پس از جداسازی، تکثیر و تیمار سلول های بنیادی مزانشیمال، MV ها با اولتراسانتریفوژ مختلف جدا شدند. سلول های T جدا شده از سلول های غیر چسبنده در طول روند تولید MoDC، با DC اختصاصی تومور در حضور میکرووزیکول های مشتق از MSC انکوبه شدند. در مرحله آخر سلول های توموری و لنفوسیت های T در پلیت 96 خانه به منطور سنجش لیز ویژه توسط فلوسایتومتری، انکوبه گردیدند. نتایج: نتایج بدست آمده نشان داد که سلول کشی سلول های T تحریک شده با آنتی ژن توموری و MV مشق از MSC1، سلول های توموری بیشتری را از بین می برد ولی این افزایش در میزان مرگ سلول های توموری نسبت به گروه های کنترل معنی دار نمی باشد(P0.05). نتیجه گیری: با انجام تحقیقات بیشتر در این زمینه، شاید در آینده بتوان امید داشت که آنتی ژن های توموری حرارت دیده به همراه MV های مشق از MSC1 اثر بهتری در میزان سلول کشی لنفوست T داشته باشند.

Title

The Effect of Tumor Antigens and Heat Shock Proteins Complexes in the Presence of Mesenchymal Stem Cells 1 Derived Microvesicles on the Cytotoxicity of T Cells Stimulated With Dendritic Cells In vitro

English Abstract

Background & Objective: Immunotherapy is a therapeutic strategy that manipulates immune responses against tumor cells. The previous studies have shown that heat shock proteins-peptide complexes (HSP-PC) have critical role in MHC-I restricted TCD8+ responses. Evidence from several studies, demonstrate that TLR4-primed mesenchymal stem cells (MSCs), or MSC1, mostly elaborate pro-inflammatory mediators. In this regard, compared to MSCs, MSC-derived microvesicles (MVs) are more stable, induce stronger signaling and their functions do not exhaust over time. So, in the present study peripheral blood monocyte derived dendritic cells (MoDC) were used to load tumor antigens and stimulate T cell mediated responses in the present of MSC1-derived MVs with glial cancer In vitro and in rat model. Methods: Tumor cell line, B92 was heated up to 43°C for 90 minutes prior to preparation of tumor cell lysate. After Isolation, proliferation and treatment of mesenchymal stem cells, MVs were purified by differential ultracentrifugation. Autologous T cells isolated from the nonadherent cells that harvested during the procedure to generate the MoDC, were incubated with tumor specific DCs in the presence of MSC1-derived MVs. For specific cytotoxic activity of delicate T cells by Flow cytometry analysis, they were cocultured with tumor cells in 96 well plates at final volume of 200 μl of CM at an effector: target ratio of 100:1.

Document Downloads