بهبود تمایز نوروگلیال از سلول های بنیادی پالپ دندان انسانی توسط مایع مغزی - نخاعی

Persian Abstract

سابقه و هدف: مایع مغزی نخاعی (CSF) دارای طیف وسیعی از مولکولهای ضروری در فرآیند نوروژنزیس است. سلولهای بنیادی پالپ دندان انسانی (hDPSCs) که از سلول های ستیغ عصبی مشتق شده اند می تواند در حضور فاکتورهای نوروتروفیک مناسب به سلولهای گلیال و نورو تمایز یابند. هدف از این مطالعه القای تمایز hDPSCs به سلولهای نوروگلیال با استفاد از اسید رتینوئیک و CSF است. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی hDPSCs از دندان مولار سوم انسانی به روش مکانیکی و آنزیمی جدا و کشت داده شدند. 105×2 سلول به هر یک از چاهکهای پلیت 6 خانه ای منتقل و با اسیدرتینوئیک )گروه 1، گروه RA) وCSF (گروه 2، CSF) به مدت 8 روز القاء شدند. همچنین به مدت 4 روز توسط اسید رتینوئیک و 4 روز توسط CSF (گروه 3، گروه RC) تیمار شدند. ایمنوسیتوشیمی Nestin ، βIII-tubulin و GFAP جهت ارزیابی استفاده شدند. طول آکسون سلولها به روش نیترات نقره بررسی و اجسام نیسل با کریزل ویوله رنگ آمیزی شد. محاسبات آماری توسط نرم افزار SPSS 16 و با آزمون های آماری One-way ANOVA و Chi Square انجام گرفت. یافته ها: مورفولوژی سلولهای تمایز یافته بطور مشخص در گرو ه های تمایزی بعد از روز 3- 5 تغییر یافت. نتایج ایمنوسیتوشیمی نشان داد که Nestin در همه گروه ها بیان شد. همچنین بیشترین درصد سلول های بیان کننده Nestin و βIII-tubulin به ترتیب در مراحل پیش القایی و القایی مشاهده شدند. اجسام نیسل به صورت ذرات توپر بنفش رنگ در سیتوپلاسم سلولهای تمایز یافته شناسایی شدند. استنتاج: یافته ها نشان میدهد که میتوا ن از اسید رتینوئیک به عنوان پیش القاگر و CSF به عنوان القاگر جهت تمایز در شرایط آزمایشگاهی hDPSCs به سلولهای نوروگلیال استفاد کرد.

Title

Improvement of Neuroglial Differentiation from Human Dental Pulp Stem Cells Using CSF

English Abstract

Background and purpose: Cerebrospinal fluid (CSF) has a broad set of molecules which is essential for neurogenesis. Human dental pulp stem cells (hDPSCs) are putatively neural crest cell-derived that can differentiate into neurons and glial cells under appropriate neurotrophic factors. The aim of this study was to induce differentiation of hDPSCs into neuroglial phenotypes using Retinoic acid (RA) and CSF. Materials and methods: The hDPSCs were isolated by mechanical enzymatic digestion from an impacted third molar and cultured. 2 × 105 cells were treated by 10-7 μM Retinoic acid (RA group) for 8 days, CSF (CSF group) for 8 days and pre-induced with RA for 4 days followed by inducing with CSF for 4 days (RC group). Nestin, βIII-tubulin and GFAP immunostaining were used for evaluating the differentiated cells. Axonal outgrowth was detected using Bielschowsky's silver impregnation method and Nissl bodies were stained in differentiated cells by Cresyl violet. Data analysis was performed in SPSS V.16 applying One-way ANOVA and Chi-square test. Results: The morphology of differentiated cells in treated groups significantly changed after 3-5 days. The immunocytochemistry results showed that nestin, the neuroprogenitor marker, was observed in all groups. Whereas, a high percentage of nestin positive cells and ΒIII-tubulin, as mature neural markers, were seen at the pre-induction and induction stage, respectively. Nissl bodies were detected as dark-blue particles in the cytoplasm of treated cells. Conclusion: The findings suggest that the RA as pre-inducer and CSF as inducer could be used for in vitro differentiation of neuroglial cells from hDPSCs.

Document Downloads