اثرات محیط کشت شرایطی شده حاصل از سلولهاي سرتولی بیضه و رتینوئیک اسید بر تعداد کلونیهاي حاصل از سلولهاي مزانشیمی مغز استخوان

Persian Abstract

چکيده زمینه و هدف: با توجه به اهمیت سلول‮های بنیادی به ویژه سلول‮های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان در تولید رده‮های مختلف سلولی امروزه تلاش بر این است که از پیوند این سلول‮ها در طی سلول درمانی جهت درمان بیماری‮های مختلف استفاده شود. تکثیر سلولی و حیات سلول‌های بنیادی پس از پیوند اهمیت بسزایی دارد. از آنجایی که ناباروری در مردان و زنان از مشکلات عمده سلامت اجتماع محسوب می‮شود، تلاش بر این است که از تمایز سلول‏های بنیادی، رده های مختلف سلولی مخصوصاً سلول‮های جنسی تولید شود. با پیشرفت تحقیقات در آینده امید آن می‮رود این سلول‮ها جهت درمان بیماری‮های مختلف مخصوصاً درمان مردانی که بافت بیضه آنها فاقد سلول‮های نطفه ای است استفاده شوند. اما در استفاده از سلول‮های بنیادی جهت سلول درمانی توجه به این نکات لازم است که اولاً محیط کشت هایی طراحی شود که تعداد این سلول‮ها را افزایش داده و کارایی پیوند را بالا ببرد و ثانیاً سلامت این سلول‮ها از لحاظ آسیب‮های AND را تضمین نماید. روش کار: در این مطالعه سلول‮های بنیادی مزانشیمی از بافت مغز استخوان موش جداسازی شده و سپس در معرض محیط شرایطی شده حاصل از سلول های سرتولی و غلظت 6-01 مولار رتینوئیک اسید قرار گرفتند. از آنجایی‮که سلولهای بنیادی مزانشیمی به شکل کلونی های فیبروبلاستیک ظاهر می شوند لذا هر سه روز یکبار پس از کشت (روزهای 2,5, 8, 11 و 51) با استفاده از میکروسکوپ اینورت تعداد کلونی ها شمارش شدند. رنگ آمیزی اتیدیم بروماید- اکریدین ارنج نیز جهت تعیین تعداد هسته های آپویتیک در سلول‮های حاصل از کشت به ترتیب در روزهای 01 و 51 کشت انجام شد تا محیط کشت مناسبی که تعداد کلونی های بیشتری تولید کرده و آسیب سلولی کمتری به همراه داشته باشد انتخاب شود. یافته ها: نتایج نشان داد اثرات رتینوئیک اسید روی رشد و بقای سلول‮های بنیادی مغز استخوان وابسته به زمان است، به نظر می‮رسد که در زمان کم باعث افزایش تکثیر سلول‌ها شده در نتیجه تعدادکلونی ها افزایش می یابد در حالی که با افزایش زمان همین غلظت اندک 1میکرو مولار رتینوئیک اسید باعث آپوپتوز سلول ها می‌گردد. همچنین محیط شرایطی شده حاصل از سلول‮های سرتولی باعث افزایش تکثیر سلول‮های بنیادی مغز استخوان می شود. نتیجه گیری: به نظر می رسد که در تمایز سلول‮های مزانشیمی به سمت سلول‮های زایا استفاده از محیط شرایطی شده در کنار رتینوئیک اسید به دلیل خاصیت تکثیری آن بهتر از رتینوئیک اسید به تنهایی باشد

Title

The Effects of Sertoli Cells Condition Medium and Retinoic Acid on the Number of Colonies of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

English Abstract

Background & objectives: According to importance of bone marrow mesenchymal stem cells in production of different cell lines, transplantation of these cells are used for treatment of many different diseases during cell therapy. Viability and proliferation of these cells after transplantation are very important. Since infertility is as public health problem in men and women, the scientists attempt to produce germ cells from differentiation of stem cells. It is supposed to use these cells for treatment of different illnesses especially for men with lack of germ cells in testes in future. However, in using stem cells for cell therapy the culture medium should be designed to increase the number of cells and efficiency of transplantation and to guarantee the health of the cells in terms of DNA damage. This study designed a suitable culture medium in order to increase the number of colonies and decrease the cell injuries. Methods: In this study mesenchymal stem cells isolated from bone marrow of mice and exposed to retinoic acid (RA) with concentration of 10-6 M and Sertoli cells condition medium. Since mesenchymal stem cells (MSCs) produce fibroblastic colonies so the number of colonies was counted every 3 days after culture (days of 2, 5, 8, 11, and 15) under inverted microscope. The staining of ethidium bromide-acridine orange was also done for determination of apoptotic nucleus in days of 10 and 15 after culture. Results: The results showed that the effects of retinoic acid on grow and viability of MSCs is related to the time. It seems that RA increased the proliferation of the cells and the number of colonies increased in low time but the apoptotic cells elevated with increasing the time of culture. Condition medium of Sertoli cells also increased the proliferation of bone marrow stem cells.

Document Downloads