روشی جديد و کار آمد براي توليد نوروسفر بیشتر از بطن طرفي مغزموش بالغ

Persian Abstract

زمينه وهد ف: امروزه مشخص شده است که ناحيه تحت بطني (Subventricular Zone=SVZ) در سیستم بطنی مغز پستانداران بالغ داراي جمعيتي ازسلولهاي بنيادي عصبي است که نورونها و سلولهاي گليال را ايجاد مي کنند. به دليل کمبود مارکرهاي خاص براي شناسايي اين سلولها روش ايجاد نوروسفر (NSA = Neurosphere Assay) در محيط آزمايشگاهي روشی متداول و انتخابي براي جداسازي، مطالعه و درک بيولوژي سلولهاي بنيادي عصبي روياني و بالغ مي باشد. روش هاي مختلفي براي ايجاد نوروسفر از مناطق مختلف سيستم عصبي مرکزي از جمله بطنهاي طرفي مغز وجود دارد. هدف از اين مطالعه ارائه راهکاري جديد و کار آمد براي توليد نوروسفر بيشتر ازناحيه تحت بطني بطنهاي طرفي مغز موش بالغ با استفاده از روش NSA مي باشد. روش کار: ناحيه تحت بطني نيمه سري بطنهاي طرفي مغز موش بالغ با دو روش متفاوت تشريح و جداسازي شده و براساس روش نوروسفر کشت داده شدند. در روش اول (روش ريتز و رينولدز) اين ناحيه بصورت يکپارچه جدا شده و پس از ايجاد سوسپانسيون تک سلولي بصورت يکجا کشت داده شد. در روش دوم يا روش برش گيري، پس از برداشتن برشهاي سريالي 400 ميکروني مغز، ناحيه تحت بطني از برشهاي نيمه سري بطنهاي طرفي جمع آوري شده و بطور جداگانه با استفاده از روش NSA کشت داده شدند. پس از هفت روز نوروسفرهاي اوليه حاصله از دو روش شمارش شده وميانگين آنها با همديگر مقايسه گرديد. يافته ها : ميانگين تعداد نوروسفرهاي بدست آمده در روش برش گيري بسيار بيشتر از روش اول بود (0001/0> P). توزيع و پراکندگي سلولهاي نوروسفرساز يا سلولهاي بنيادي عصبي درطول محور قدامي- خلفي نيمه سري بطنهاي طرفي يکسان نبوده و بالاترين تراکم این سلولها در فاصله 74/0 میلیمتری سمت سری نقطه برگما مشاهده گردید. نتيجه گيري : روش دوم يا روش برش گيري بدليل توليد نوروسفرزياد از ناحيه تحت بطني نسبت به روش اول يا روش کشت يکجاي اين ناحيه، روشي کار آمد و مناسب مي باشد.

Title

A New and Efficient Method for More Neurosphere Growing from the Adult Mouse Brain Lateral Ventricle

English Abstract

Background and objectives: It is now clear that the adult mammalian subventricular zone (SVZ) contains a population of neural stem cells (NSCs) that give rise to neurons and glia. Owing to their rarity, and a paucity of NSC—specific markers, the neurospher assay (NSA) is a common and selective method for isolating and understanding the biology of embryonic and adult neural stem cells. There are different methods for neurosphere growing from different regions of the CNS including Lateral ventricles. The objective of this study is introducing a new and efficient strategy for more neurosphere growing from the SVZ of the adult mouse brain lateral ventricle using NSA. Methods: Two different methods were used in order to isolate and culture the SVZ of the lateral ventricles using NSA. In the first method (Ritze and Reynolds method) the rostral part of the SVZ of the lateral ventricles were dissociated into single cell suspension and cultured using NSA. In the second method (vibratome sectioning of the brain) after cutting the brain into 400 µm serial sections using a vibratom, the SVZ was microdissected from all sections of rostral part of lateral ventricle and cultured separately, using NSA. Primary neurospheres were counted seven days after plating. Then the mean numbers of neurospheres generated in two different methods were compared. Results: The mean number of neurospheres generated by sectioning method was much higher than the one generated using first method (P<0.0001). The distribution and frequency of neurosphere forming cells (or NSCs) is not the same along the antero-posterior axis of the rostral part of the lateral ventricle. The greatest frequency of neurosphere forming cells was detected in 0.74mm rostral to the bregma. Conclusion: The sectioning method, due to more neurosphere generation, in comparison to the first method is more appropriate and efficient for neurosphere growing from the SVZ of the lateral ventricle.

Document Downloads