ارزیابی نورون زایی سلولهاي بنيادي عصبي بااستفاده از فلوسيتومتري و مقایسه آن با روش شمارش دستی

Persian Abstract

مقدمه : شناخت عوامل موثر در افزايش نورون زايي سلولهاي بنيادي عصبي براي جايگزيني نورونهاي از دست رفته در بيماريهاي عصبي از اهميت زیادی برخوردار است. كشت سلولهاي بنيادي عصبي روشي مطلوب در شناخت اين عوامل بنظر مي رسد ولي در آناليز سلولي بايد از روشي سريعتر و كارامدتر از روش شمارش دستی بهره جست تا از طريق آن بتوان تعداد زيادي از عوامل را در کم ترین زمان و با هزينه مورد بررسي قرار داد. هدف اين مطالعه استفاده از فلوسيتومتري بعنوان روشی جایگزین برای ارزيابي ميزان نورون زايي سلولهاي بنيادي عصبي بود. روش ها : سلولهاي بنيادي عصبي جدا شده از مغز جنين هاي 14 روزه موش، طي روشهاي يك مرحله اي و دو مرحله اي تمايز داده شدند. پس از انجام هيستوشيمي برای مارکرهای نورونی و آستروسیتی، ابتدا روش شمارش دستي با روش فلوسيتومتري در تعیین درصد نورونها و آستروسیتها مقايسه شد و سپس دو روش مختلف تمايز سلولهاي بنيادي عصبي از نظر درصد نورونها و آستروسیتهای ایجاد شده، با استفاده از فلوسيتومتري با يكديگر مقايسه گرديدند. یافته ها : در ارزیابی ميانگين درصد نورونها و آستروسیت ها بین روش های شمارش دستي و فلوسيتومتري تفاوتي مشاهده نشد. بررسي فلوسيتومتري، تفاوت معني داري را بين ميانگين درصد نورونها و آستروسیت هاي روش های يك مرحله اي و دو مرحله اي تمایز سلولهاي بنيادي عصبي نشان داد( 001/0 P<) . نتيجه گيري : نتايج نشان داد كه فلوسيتومتري روش ساده و قابل اعتمادي است كه مي توان از آن بجاي شمارش دستي در ارزیابی میزان نورون زايی سلولهای بنیادی عصبی استفاده كرد. این مسئله بویژه در غربالگري تاثیر مواد و عوامل مختلف بر میزان نورون زایی از اهمیت به سزایی برخوردار است.

Title

Comparison of Neural Stem Cells Neurogenesis by Using Flow Cytometry versus Manual Counting Method

English Abstract

Finding factors that can increase neurogenesis are of great importance. To find these factors, it seems that neural stem cells culture is an ideal method. To analyze the effect of different factors in a limited period of time and with the least cost, finding an easier and more efficient method than normal manual counting method is needed. The aim of this study was using flow cytometry as an alternative method to evaluate neural stem cells neurogenesis. Neural stem cells from E14 mouse brain have been differentiated in a one- step and a two -step methods. After performing immunohistochemistry for neuronal and astrocytic markers, manual and flow cytometry methods have been compared in determining the percentage of neurons and astrocytes. Then, the percentage of neurons and astrocytes generated in two different differentiation methods has been compared using flow cytometry. Our findings showed that there wasn't any statistical difference between manual and flow cytometry methods in determining the percentage of neurons and astrocytes. Comparing differentiation methods by flow cytometry, showed that the percentage of both neurons and astrocytes were significantly different in theses two methods (p<0.001). Flow cytometry is a simple and reliable method that can replace manual counting method to evaluate neurogenesis of the neural stem cells. This method would be very useful especially when a high content screening of different factors and compounds is needed.

Document Downloads