جداسازي، القاي تمايز عصبي و گليال و بررسي بيان پنج ژن خود بازسازي در سلولهاي بنيادي عصبي مغز موشهاي بالغ

Persian Abstract

هدف: جداسازي، القا تمايز عصبي و گليال و بررسي بيان ژنهاي خود بازسازي Nucleostemin، Bmi-1، ZFX، Hoxb-4 و Sox-9 در سلولهاي بنيادي عصبي مغز موشهاي بالغ مواد و روشها: تحقيق حاضر يک مطالعه تجربي است. به طور خلاصه، براي جداسازي سلولهاي بنيادي عصبي از مغز موش، بخشي از ناحيه دور بطني مغز موشهاي بالغ جداسازي و قطعه قطعه شد. سپس از محلولهاي آنزيمي حاوي هيالورونيداز و ترپسين براي هضم بافتي و خارج ساختن سلولهاي بنيادي عصبي استفاده شد و سلولهاي به دست آمده در محيط حاوي فاکتورهاي رشد EGF و bFGF کشت داده شدند. پس از يک هفته نوروسفيرهاي اوليه به صورت معلق در محيط کشت ظاهر شدند که پس از انتقال به ديشهاي آغشته به پلي – ال - ارنيتين، به سلولهاي نوروگليال و عصبي تمايز پيدا کردند. سلولهاي تمايز نيافته و تمايز يافته تحت ارزيابيهاي مورفولوژيک، ايمونوسيتوشيمي و مولکولي قرار گرفتند. يافته ها: نتايج مشاهدات مختلف به عمل آمده در اين پژوهش نشان داد که سلولهاي جدا سازي شده از ناحيه دور بطني شاخ قدامي مغز موشهاي بالغ در محيط کشت حاوي فاکتورهاي رشد (Epidermal Growth Factor) EGF و (basic Fibroolast Growth Factor) bFGF تکثير شده و در ديشهاي آغشته به پلي- ال- ارنيتين و محيط کشت حاوي يک درصد سرم جنين گاوي به سلولهاي عصبي و گليال تمايز پيدا مي کنند. بررسيهاي ايمونوسيتوشيمي براي ژن هاي GFAP، MAP2 و O4 صحت انجام اين تمايز را نشان داد. همچنين بيان ژنهاي Nucleostemin، Bmi-1، ZFX، Hoxb-4 و Sox-9 در سلولهاي بنيادي عصبي نشان داده شد. نتيجه گيري: از اين پژوهش مي توان نتيجه گرفت که مغز موشهاي بالغ حاوي رده اي از سلولهاي بنيادي است که اين سلولها قادرند به سلولهاي عصبي و گليال تمايز پيدا کنند و بيان ژنهاي Nucleoxtemin، Bmi-1 و Sox-9 در سلولهاي جداسازي شده، تاييدي بر ماهيت بنيادي اين سلولها بود. همچنين مطالعه حاضر اولين گزارش مبني بر بيان ژنهاي مسوول خود بازسازي ZFX و Hoxb-4 در سلولهاي بنيادي عصبي است.

Title

Isolation, Induction of Neural and Glial Differentiation and Evaluating the Expression of Five Self Renewal Genes in Adult Mouse Neural Stem Cells

English Abstract

Purpose: Isolation, induction of neural and glial differentiation and evaluating the expression of Nucleostemin, ZFX, Hoxb-4, Sox-9 & Bmi-1 self renewal genes in adult mouse neural stem cells Materials and Methods: Breifly, for isolation of neural stem cells, frontal part of adult mouse brain was minced in PBS and digested by enzyme solution, containing hyaloronidase and trypsin. Isolated cells were cultured in medium supplemented by EGF, bFGF. After one week, primary neurospheres were appeared in culture medium which differentiated into neural and neuroglial cells, after transferring to poly-L-ornyethin coated dishes. Differentiated cells were examined by morphological, immunocytochemical and molecular evaluations. Results: Our results showed that isolated cells from periventricular area of mouse adult brain can be expanded in medium containing EGF, bFGF and Fetal calf serum and differentiated into neural and neuroglial cells. Immunocytochemical studies for GFAP, MAP2 and O4 genes, proved the differentiation. Our results also showed that Nucleostemin, ZFX, Hoxb-4, Sox-9 & Bmi-1 are expressed in mouse neural stem cells. Conclusion: Mouse adult brain contains a type of stem cell which can be differentiated into neural and neuroglial cells. In addition, expression of Sox-9, Nucleostemin and Bmi-1 self renewal genes in undifferentiated neural stem cells can be considered as a proof for stem cell identity of isolated cells. This study is the first report which shows the expression of ZFX and Hoxb-4 genes in neural stem cells.

Document Downloads