بررسی اثرات ضدسرطانی ترکیب رتینوئیک اسید تمام ترانس وداکاربازین برروی سلولهای سرطانی CD117مثبت مشتق ازرده مقاوم ملانوما A375

خلاصه فارسی

سابقه وهدف: ملانوما یکی از شایع ترین فرم های سرطان پوست می باشد که دارای انواع مختلف سلول می باشند که با مارکرهای سطحی شناخته شده اند. رسپتور CD117 در روی ملانوسیت ها قرار دارد که فاکتورهای رشد سلولهای بنیادی به آن متصل می شوند و باعث تکثیر، مهاجرت سلولهای ملانوسیت می شوند. داکاربازین داروی شیمی درمانی مورد تایید FDA برای درمان ملانوما می باشد. مطالعات نشان داده است که رسپتور RARβ در سلولهای ملانوما بیان می شود و رتینوئیک اسید با واسطه رسپتور RARβباعث مهار فرایند گلیکولیز می شود، لذا در این مطالعه تاثیر ترکیب داکاربازین و رتینوئیک اسید تمام ترانس را بر روی سلولهای CD117+ بررسی کردیم. مواد و روش ها: سلول های ملانوما A375 در محیط کشت DMEM کشت داده شده و سلول های CD117+ توسط تکنیک مکس جداسازی شدند. اثرات سمیت دارویی رتینوئیک اسید تمام ترانس (8 ،12 ،16 ، 24، 32 و 64 میکرومولار) ، داکاربازین (۸۰۰،400، ۱۰۰۰، ۱4۰۰،۱2۰۰ و 1800میلی گرم ) به طورمجزا و ترکیب دوزهای مختلف داکاربازین با رتینوئیک اسید با روش فعالیت متابولیکی (MTT)، رنگ آمیزی آکریدین نارنجی و اتدیوم بروماید انجام شد و بررسی توقف سیکل سلولی با رنگ آمیزی 2-4-دی آمینو2- فنیل ایندول دی هیدرو کلراید (DAPI) به روش فلوسایتومتری مطالعه شد. نتایج: مقدار IC50 در سلول های سرطانیCD117+ تیمار شده با غلظت های مختلف ATRA و داکاربازین تعیین شد و در این مطالعه ما نشان دادیم که ترکیب ۲۰ میکرو مولار رتینوئیک اسید با داکاربازین باعث کاهش معنی دار IC50 در مقایسه با گروه داکاربازین به تنهایی شد ( P<0/05). نتایج ما نشان داد که در گروه ترکیبی با افزایش غلظت رتینوئیک اسید، داکاربازین باعث افزایش تعداد سلولهای آپوپتوتیک و نکروتیک می شود. علاوه برا این، داکاربازین باعث توقف سیکل سلولی در مرحله S شد و ترکیب داکاربازین با رتینوئیک اسید باعث توقف معنی داری سیکل سلولی در مرحله G0/G1 شد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که ترکیب رتینوئیک اسید با داکاربازین توانایی القاء مرگ سلولهای سرطانی CD117+ ملانوما را دارند و ممکن است در آینده در درمان¬ ملانوما استفاده شود.

عنوان انگليسی

Cytotoxic effects of dacarbazine and all-trans retinoic acid on CD117+ cells derived from malignant melanoma

خلاصه انگلیسی

Background & objective: Melanoma is a common form of skin cancer that contain different cell types recognized by various cell surface markers. CD117+ receptors located on the melanocyte that stem cell growth factors attach to it and CD117+ receptor signaling leading to metastasis and proliferation. Dacarbazine is the only chemotherapeutic agent approved by the FDA for treatment of melanoma. Studies showed that RARβ expressed in the melanoma cells. RARβ-mediated signaling is important to inhibit glycolysis. Here, we evaluated cytotoxic effects of ATRA and dacarbazine on CD117+ melanoma cells. Methods: The A375 melanoma cell line were cultured in DMEM medium and CD117+ cells were isolated using magnetic activated cell sorting (MACS). Cytotoxic effects of ATRA (8, 10, 16, 24, 32 and 64 μM), dacarbazine (800, 1000, 1200, 1400 and 1800 mg/ml) and ATRA/dacarbazine were studied using cell proliferation assay (MTT), acridine orange/ ethidium bromide staining. We performed flow cytometry to evaluate cell cycle arrest (using DAPI staining). Results: We determined IC50 value after treatment with various concentration of ATRA and dacarbazine in CD117+ cells. We found that 20 µM ATRA with dacarbazine caused significantly decrease in IC50 value when compared to dacarbazine alone (p<0.05). Our results showed that increasing ATRA concentration in combination group (ATRA/dacarbazine) caused more apoptosis and necrosis. In addition, ATRA/dacarbazine mediated cell cycle arrest at G0/G1 phase and dacarbazine alone inhibited the cells in S phase. Conclusion: Our results showed that ATRA combination with dacarbazine cause more cytotoxic effects on CD117+ cells and it may be used in future to treat melanoma.

Document Downloads