بررسی فراوانی و تایپینگ ملکولی پنوموسیستی سژایرووس یدر مونه های بالینی لاواژ ریوی بیماران مبتلا به توبرکلوز در شهرستان اردبیل با استفاده از تکنیک های Nested-PCR ، RFLP ، CSGE

خلاصه فارسی

چکیده پنوموسیستیس ژایرووسی قارچی است فرصت طلب که درشاخه آسکومایست ها طبقه بندی می شود. این قارچ در اپیتلیوم ریه ی افرادی که به دلایل عفونت های زمینه ای مختل کننده سیستم ایمنی سلولی نظیر ایدز، عفونت های تنفسی مزمن و بدخیمی های ریوی و سل کلونیزه شده و علائم بالینی ایجاد می کند. تا کنون تحقیقات مقطعی شناسایی عفونت هم زمان پنوموسیستوز در افراد مسلول به انضمام آشکارسازی مقاومت دارویی انجام نشده بود و این موضوع می توانست زمینه ی مطالعات گسترده باشد. هدف از این مطالعه ی مقطعی، بررسی فراوانی و کلونیزاسیون قارچ پنوموسیستیس ژایرووسی در نمونه لاواژ ریوی تعداد 100 بیمار مسلول در مقایسه با تعداد 100 نمونه لاواژ ریوی بیمار غیر مسلول (دارای علائم ریوی)، با استفاده از رنگ آمیزی مستقیم گیمسا، متنامین نقره و سنجش آنزیم لاکتات دهیدوزناز توتال بود. همچنین روش مولکولی Nested-PCR بر روی ژن Mt-LSU (ساب یونیت بزرگ DNA میتوکندریال)، DHPS (دی هیدروپترات سنتاز) و بکارگیری تکنیک RFLP جهت بررسی حضور موتاسیون مقاومت دارویی و تشکیل هتروداپلکس با استفاده از تکنیک CSGE انجام گردید. نتایج حاصل از تشخیص ارگانیسم در نمونه های بالینی با استفاده از تکنیک های رنگ آمیزی گیمسا و متنامین نقره به ترتیب 15 و 5/13 درصد گزارش شد و احتمال وجود موارد مثبت کاذب را مطرح ساخت. سطوح انزیم لاکتات دهیدروزناز در بیماران دارای عفونت مضاعف سل و پنوموسیستوز به طور قابل توجهی بالاتر (155±446واحد در لیتر) از میانگین سطوح آنزیم در افراد مسلول(50±310 واحد در لیتر) بود، سطوح آنزیم در افراد کنترل غیرمسلول (51±186 واحد در لیتر) گزلرش شد. در حالیکه با بکارگیری روش ملکولی و مشاهده قطعات 260و 269 جفت بازی حضور پنوموسیستیس ژایرووسی در 5 نمونه ی بالینی (5درصد) گزارش گردید که نشان دهنده ی اختصاصیت بالای تکنیک نسبت به روش رنگ آمیزی است. مطالعات تایپینگ ارگانیسم با استفاده ازتکنیک RFLP و بکارگیری آنزیم برش دهنده ی ACCI هیچ گونه اثری بر روی جایگاه باز 165 نداشت که معرف موتاسیون (مرتبط با مقاومت به آنتی بیوتیک های گروه سولفا) در هر 5 ایزوله ی بالینی می باشد. با بکارگیری آنزیم برش دهنده ی HeaIII نیز هیچ گونه اثری بر روی جایگاه بازی 171 چهار ایزوله ی بالینی موتانت مشاهده نشد و تنها یک ایزوله بالینی بصورت غیرموتانت شناسایی گردید. بدنبال بکارگیری تکنیک CSGE بر روی ژن دی هیدروپترات سنتاز، تشکیل باند های هتروداپلکس قادر به آشکار سازی موتاسیون های تک بازی در 4 ایزوله ی تائید شده با روش RFLP گردید.

عنوان انگليسی

The frequency and typography of pneumocysteine typing of psychosis in the clinical manifestations of pulmonary lavage lavage in patients with tuberculosis in Ardabil city using techniques Nested-PCR ، RFLP ، CSGE

خلاصه انگلیسی

Pneumocystis jirovecii is an opportunistic fungi which is classified in Ascomycota phylum. This fungus is colonized in alveolar epithelium of patients with impaired cell-mediated immunity like as AIDS, chronic pulmonary disease و lung malignancy and TB then causes Pneumocystosis or intensifies the basic pulmonary disease due to co-infection. Pathogenicity of this fungus is associated with inflammation, obstruction and malignancies of respiratory ways. In this cross sectional study we used two methods of Nested-PCR and Methenamine silver stain to investigate the frequency of presence and colonization of Pneumocystis jiroveci in 100 BAL specimens of TB positive patients compared to 100 BAL of TB negative (with unknown pulmonary disorders) The mt-Lsu rRNA Gene (Large sub unit of mitochondrial ribonucleic acid) is used to be amplified as target in Nested-PCR. This mitochondrial gene has high identical sensitivity with more specificity and gave more positive results in clinical samples. The sequencing approach is also used to more sub phylogenic studies and P.jirovecii confirmation in PCR products. RFLP and CSGE techniques applied on DHPS gene to discriminate eventual sulfa drug resistance. And single-base mismatches. High false positives were reported using GMS staining (13.5%) While using Nested-PCR, 5 positive cases were reported from the tuberculosis group Which is relatively lower than that of people with AIDS. No reports of co- infection were found in TB negative patients Using enzyme AccI in RFLP method all five clinical isolates in the position 165 have mutations, while using HeaIII restriction enzymes, four clinical isolates except IS3 have mutation at position 171 However, by CSGE on DHPS fragments, Heterodaplex bands were able to detect single-base mutation in four isolates mentioned with the exception of the third isolate.

Document Downloads