بررسی اثر داروی بواسیزومب بر روی کمپلکس های میتوکندریایی در میتوکندری های ایزوله شده از قلب رت

خلاصه فارسی

مقدمه: سمیت قلبی القا شده دارویی معمولا موجب ایجاد نارسایی قلبی یا اختلال عملکرد سیستولی بطن چپ می-شود. اختلال عملکرد بطن چپ قلبی از عوارض جانبی نادر گزارش شده به دنبال مصرف بواسیزومب است که شیوع 1/2 % دارد و این میزان شیوع مستقل از روش تجویز دارو می باشد. نظر به اینکه یک دارو از راه های مختلف می تواند تاثیرگذاری داشته و تغییراتی را در بدن ایجاد کند، شناخت این راه ها کمک می کند تا از عوارض جانبی آن ها جلوگیری شده و یا در جهت تقویت اثرات مفید آن ها گام برداشته شود. با توجه به فعالیت دائمی قلب، یکی از مهم-ترین اندامک های این اندام، میتوکندری است تا نیاز دائمی قلب به انرژی را برطرف کند. در این پایان نامه سعی شده است که تاثیر بواسیزومب بر روی فعالیت کمپلکس های میتوکندری بررسی شود. میتوکندری های قلب رت توسط سانتریفیوژهای افتراقی از رت های ویستار ایزوله شدند. با استفاده از ارزیابی های زیست شیمیایی و اسپکتروفوتومتری فعالیت کمپلکس های میتوکندریایی، سوکسینات دهیدروژناز و تورم میتوکندریایی در میتوکندری های ایزوله شده محاسبه شد. تنها کاهش فعالیت کمپلکس ΙΙ پس از مواجهه با بواسیزومب (μg/ml 50 و 100) مشاهده گردید. در مجموع برای اولین بار با این مطالعه مقدماتی، کاهش مشهود فعالیت کمپلکس ΙΙ پس از مواجهه با بواسیزومب مشاهده گردید. مواد و روش کار: ابتدا رت های نر ویستار که بازه ی وزنی در حدود 300-200 گرم داشتند انتخاب گردید. بافرها و مواد آزمایش مهیا شد. رت بی هوش شده و طی جراحی قلب آن جدا گردیده سپس خرد شده با هموژنایزر شیشه ای در ml10 از بافر ایزولاسیون هموژن شد. پس از دوبار سانتریفیوژ کردن به مدت 10 دقیقه به ترتیب با دور g1000 و برداشتن محلول رویی و g10000 دور ریختن محلول رویی، میتوکندری ها در بافر assay حل گردید. با آزمایش برادفورد میزان میتوکندری به دست آمد. غلظت میتوکندری بر روی mg/mL 1 تنظیم شد. با استفاده از روش اسپکتوفوتومتری در حضور غلظت μl 50 و μl100 بواسیزومب میزان فعالیت کمپلکس های میتوکندریایی اندازه گیری شد. آزمایشات مربوط به میزان فعالیت هر کمپلکس حداقل سه بار انجام گردید. نتایج: طبق بررسی های مربوط به فعالیت آنزیمی OXPHOS بر روی میتوکندری های ایزوله شده از قلب رت مشاهده شد که با غلظت های μl50 و μl100 بواسیزومب فعالیت آنزیمی کمپلکس ΙΙ به شدت نسبت به کنترل کاهش پیدا کرد. فعالیت کمپلکس های Ι و ΙΙΙ و ΙV در مواجهه با بواسیزومب کاهش نیافت. به همین منوال کمپلکس های ΙΙΙ+Ι و ΙΙΙ+ΙΙ نیز کاهش شاخصی را نشان ندادند. در مجموع این نتایج نشان می دهد که کمپلکس ΙΙ هدف اصلی بواسیزومب در زنجیره تنفسی میتوکندری های قلب رت است.

عنوان انگليسی

The effect of bevacizumab on mitochondrial complexes in isolated mitochondria from rat heart

خلاصه انگلیسی

INTRODUCTION: Drug-induced cardiotoxicity usually manifests as heart failure or left ventricular systolic dysfunction. Left ventricular dysfunction is a rarely reported side effect of bevacizumab (BEV) with an incidence of 1.2%, and this occurs irrespective of the route of administration. As we know there are many various ways for a drug to affecting body and make changes, finding out these ways will help prevent side effects of them or empowering their beneficial effects. Based on continuous working of the heart, one of main and necessary organelles in this organ is mitochondria because supply hearts ceaseless demands of energy.In this study, we focused on an analysis of bevacizumab effects on mitochondrial complexes activities. Rat heart mitochondria were isolated using differential centrifugation from wistar rats. Using biochemical and spectrophotometry assays we evaluated mitochondrial complexes activity, succinate dehydrogenases, mitochondrial swelling in isolated mitochondria. We observed only decreased activity of complexes II after exposure with bevacizumab (50 and 100 μg/ml). Together, for the first time, this preliminary study has demonstrated a significant decrease in activity of complexes II after exposure with bevacizumab. MATERIAL & METHODS : Male wistar rats weighting 200-300g were purchased.Buffers and other needed material was prepared . Rats were anesthetized and the heart was surgically extracted. The isolated heart was chopped and destroyed with a glass homogenizer in a 10-fold volume of the medium containing isolation buffer. The homogenate was centrifuged at 1000× g for 10 min, and the pellet was removed. The mitochondria contained in the supernatant were sedimented at 10000× g for 10 min. The protein content in mitochondria was determined using the Bradford assay. Protein concentration in the suspension was 1 mg/mL. The enzymatic activities of oxidative phosphorylation (OXPHOS) complexes I, II, III, IV, I + III, II + III and citrate synthase were measured in isolated rat heart. For all assays, enzymatic activity was measured in the presence of 50 and 100 μg/ml bevacizumab. Experiments were performed at least three times for each treatment RESULT: OXPHOS enzymatic activity in isolated mitochondria obtained from rat heart was measured.Complex II activity was significantly reduced by bevacizumab at 50 and 100 μg/ml compared with control group. Activities of complex I, complex III and complex IV were not affected by bevacizumab . Also complexes I/ III and II/ III activity were not significantly reduced to control activity by bevacizumab . In summary, these results confirm that complex II is the principal OXPHOS target for bevacizumab in rat heart mitochondria.

Document Downloads