بررسی الگویابی در سلول های عصبی مشتق از اجسام شبه جنینی و تجمع سلولی القا شده با رتینوئیک اسید

خلاصه فارسی

مقدمه: در مورد الگویابی (patterning) سلول های عصبی تمایزیافته از سلول های مختلف، مطالعات بسیار محدود بوده و اطلاعات زیادی در دست نیست. در این تحقیق، با القای تمایز عصبی توسط رتینوئیک اسید در EBهای دو گروه hanging drop و aggregate حاصل از رده سلولی P19، patterning سلول های عصبی تمایز یافته در سطح ژنی بررسی و مقایسه شدند. سلول های P19 یک رده از سلول های کارسینومای جنینی موش محسوب می شوند که قادرند تحت تأثیر رتینوئیک اسید بطور غیر قابل برگشتی به سلول های عصبی تمایز یایند. مواد و روش ها: رده سلولی P19 به صورت کشت چسبنده از بانک سلولی پاستور تهیه و در محیط کشت Minimum Essential Medium Alpha= MEM-A حاوی mg/L 4500 گلوکز و 10% FBS به دو روش آویزان و توده ای کشت داده شدند تا اجسام شبه جنینی (EBs) به دست آمد. سپس EBهای حاصل از هر دو روش در دو گروه کنترل و 1μM RA به مدت 4 روز سوسپانسیون شدند. 8 روز بعد از شروع القا، نورون های حاصل از این اجسام با روش های میکروسکوپ اینورت و Real Time PCR مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج: در پایان روز 8 بعد از آغاز القای تمایز عصبی در هر دو روش قطره گذاری و توده ای، زوائد سلولی طویل و منشعبی از قسمت های مختلف سلولی ظاهر شدند و شبکه های عصبی قابل رؤیتی را به وجود آورند. ارزیابی و مقایسه میزان بیان نشان گرهای تمایز عصبی از جمله Nes، TUB βIII و Map2 نشان داد که به جز سطح mRNA مارکر Nes که در سلول های عصبی گروه توده ای بالاتر بود اختلاف معنی داری در بین دو گروه وجود نداشت. در مورد مارکرهای neural identity که هویت نورون های حاصل را در EBs دو گروه قطره گذاری و توده ای نشان می دهند نیز اختلاف معنی دار نبود. نتیجه گیری: اجسام شبه جنینی از هر دو روش فوق الذکر می توانند تحت القای RA تمایز قابل توجه و مشابهی به سمت سلول های عصبی شبه نورون حرکتی با هویت مکانی در طول محور سری – دمی داشته باشند و این می تواند به عنوان پایه ای برای مطالعات تمایز و پیوند سلول های عصبی در in vitro و در in vivo نظر گرفته شود.

عنوان انگليسی

Evaluation of patterning in neural cells derived from embryoid bodies and cell aggregation induced with retinoic acid

خلاصه انگلیسی

Introduction: Very limited research is available on the patterning of neurons differentiated from different cells. In this research, patterning of differentiated neural cells was investigated and compared by inducing neural differentiation in embryoid bodied (Ebs) of two groups, hanging drop and aggregate obtained from P19 cells. P19 cells are a type of mouse embryonal carcinoma cells that can irreversibly differentiate into nerve cells under the influence of retinoic acid. Methods and material: P19 cell line was cultured in Minimum Essential Medium Alpha medium containing 4500 mg/L glucose and 10% FBS in two hanging drop and aggregation methods. Then, the EBs obtained from both methods was suspended in two control and 1μM RA groups for 4 days. 8 days after induction, the resulting neurons were evaluated by inverted microscope and Real Time PCR methods. Results: At the end of the 8th day after the induction of neural differentiation in both hanging drop and aggregation methods, long and branched cell process appeared from different cell parts and formed visible neural networks. Evaluation and comparison of the expression level of neural differentiation markers including Nes, TUB βIII and Map2 showed that there was no significant difference between the two groups except for Nes marker mRNA level which was higher in the neurons of the aggregation group. In the case of neural identity markers that show the identity of the resulting neurons in the EBs of the two hanging drop and aggregation groups, there was no significant difference. Conclusion: EBs from both mentioned methods can undergo significant and similar differentiation towards motor neuron-like neurons with spatial identity along the rostro-caudal axis under RA induction, And this can be considered as a basis for the studies of differentiation and transplantation of nerve cells in vitro and in vivo.

Document Downloads