بررسی اثر مهارکننده گیرنده P2X7 در بیان ژن های NOX1 ، MMP3 و TGF-β در سلولهای ماکروفاژ القا شده با LDL اکسیده

خلاصه فارسی

زمینه: سلول های کف آلود (Foam cell)، ماکروفاژ های مملو از چربی هستند که نقش مهمی در ایجاد آترواسکلروزیس دارند. سلول های کف آلود با افزایش بیان فاکتور های التهابی و نیز با افزایش استرس اکسیداتیو ناشی از افزایش فعالیت NADPH اکسیداز باعث پیشرفت آترو اسکلروز می شود. همچنین با افزایش فعالیت آنزیم های متالوپروتئیناز باعث ناپایداری پلاک و ایجاد آسیب عروقی میشود. P2X7 جزئی از گیرنده پورینرژیک، کانال کاتیونی غیرانتخابی، در سلول های ایمنی بخصوص ماکروفاژ التهابی بیان میشود. هدف : در مطالعه حاضر اثر مهار کننده P2X7 بر بیان ژن های درگیر در فرایند ایجاد و توسعه آترواسکلروزیس در ماکروفاژ های القا شده با LDL اکسیده (فاکتور اصلی در ایجاد سلول کف آلود ) را بررسی کرده ایم. مواد و روش ها: گروه های مورد مطالعه شامل گروه 1 (کنترل): سلول های THP-1 (سلولهای مونوسیت) تیمار شده با PMA (ماده موثر در تمایز مونوسیت به ماکروفاژ) ، گروه 2: سلول های THP-1 تیمار شده با PMA و OX-LDL، گروه 3: سلول های THP-1 تیمار شده با PMA و OX-LDLو مهار کننده P2X7 میباشد. در این مطالعه سلول های THP1 (سلول های پیش ساز مونوسیتی ) به وسیله PMA به سلول های ماکروفاز تبدیل شدند. سپس سلول های ماکروفاژ با LDL اکسیده جهت تشکیل سلول های کف آلود و نیز جهت بررسی اثر P2X7، ماکروفاژها با LDL اکسیده همراه مهار کننده P2X7 تیمار شدند. از رنگ آمیزی Oil Red O (ORO) جهت تایید ایجاد سلول های کف آلود استفاده شد. سپس بعد از استخراج RNA و سنتز cDNA بیان ژن های NOX1 ، MMP3 و TGF β با تکنیک qPCR بررسی شدند. یافته ها: نتایج حاصل از ORO نشان دهنده ی مهار P2X7 باعث کاهش تشکیل سلول های کف آلود حاصل از OX-LDLمیشود. نتایج RT-PCR نشان دهنده مهار P2X7 باعث کاهش بیان ژن NOX1 نسبت گروه تیمار شده با OX-LDL(P<0.001) و نیز کاهش بیان ژن MMP3 نسبت گروه تیمار شده با OX-LDL (P<0.001)و کاهش بیان ژن TGF β نسبت گروه تیمار شده با OX-LDL بود (P<0.0001). نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان دهنده تاثیرات مثبت مهار گیرنده P2X7 جهت سرکوب روند تشکیل فوم سل و تاثیرات چشمگیر بر مهار بیان ژنهای آتروژنیک بود. به طور کلی پیشنهاد می شود که از این ترکیب بعنوان یک گزینه کاربردی جهت بررسی های بیشتر در راستای درمان و یا کنترل بیماری آترواسکلروزیز استفاده شود.

عنوان انگليسی

The evaluation of the effect of P2X7 receptor inhibitor at macrophages induced OX-LDLon expression of NOX1, MMP-3 and TGF-B genes level

خلاصه انگلیسی

Background: Foam cells are macrophages filled with fat that play an important role in the development of atherosclerosis. Foam cells promote the development of atherosclerosis by increasing the expression of inflammatory factors and also by increasing the oxidative stress caused by increasing the activity of NADPH oxidase and other inducing enzymes. Also, by increasing the activity of metalloproteinase enzymes, it causes plaque instability and vascular damage. P2X7 receptor is part of purinergic receptor, non-selective cation channel, expressed in immune cells, especially inflammatory macrophages. Aim: In the present study, we have investigated the effect of P2X7 receptor antagonist on the expression of genes involved in the process of creation and development of atherosclerosis in macrophages induced by oxidized LDL (the main factor in foam cell formation). Materials and methods: The studied groups include group 1 (control): THP-1 cells treated with PMA, group 2: THP-1 cells treated with PMA and ox-LDL, group 3: THP-1 cells 1 is treated with PMA, OX-LDLand P2X7 inhibitor. In this study, THP1 cells (monocyte progenitor cells) were transformed into macrophage cells by PMA. Then macrophage cells were treated with oxidized LDL to form foamy cells and also to investigate the effect of P2X7 receptor, macrophages were treated with oxidized LDL along with P2X7 antagonist. Oil Red O (ORO) staining was used to confirm the formation of foamy cells. Then, after RNA extraction and cDNA synthesis, the expression of NOX1, MMP3 and TGF β genes were checked by qPCR technique. Result: The results of ORO show the ability of P2X7 to reduce the production of foam cells from OX-LDL. RT-PCR results show the ability of P2X7 to decrease the expression of NOX1 gene compared to the group treated with OX-LDL(P<0.001) and decrease the expression of the MMP3 gene compared to the group treated with OX-LDL(P<0.001) and decrease the TGF gene. will be b was the ratio of the group treated with OX-LDL(P<0.0001). Conclusion: The results of this study showed the positive effects of inhibiting the P2X7 receptor to suppress the formation of foam cell and the significant effects on inhibiting the expression of atherogenic genes. In general, therefore, this combination can be used as a practical option for further investigations

Document Downloads