جداسازي سلولهاي بنیادي و پیش ساز عصبی از مغز موش بالغ با روش ایجاد نوروسفر

خلاصه فارسی

زمینه و هدف: سلولهاي بنیادي دستهاي از سلولهاي تمایز نیافته میباشند که قابلیت تمایز به انواع سلولهاي تخصص یافته را دارند. کشف این سلولها در سیستم عصبی مرکزي پستانداران که تا مدتها پیش تصور میشد فاقد هرگونه قدرت ترمیم و بازسازي میباشد، امیدهاي تازهاي را براي درمان بیماريهاي دژنراتیو سیستم عصبی مرکزي نظیر سکته مغزي، بیماري پارکینسون، آلزایمر و ضایعات نخاعی ایجاد نموده است. بدلیل اهمیت موضوع، تصمیم گرفته شد نحوه جداسازي سلولهاي بنیادي عصبی از مغز موش بالغ با استفاده از روش ایجاد نوروسفر و تمایز آنها به سلولهاي بالغ سیستم عصبی توضیح داده شود. روش کار: ناحیه تحت بطنی نیمه سري بطنهاي طرفی مغز موش بالغ تشریح و جداسازي شده و پس از ایجاد سوسپانسیون تک سلولی بر اساس روش ایجاد نوروسفر کشت داده شد. پس از هفت روز نوروسفرهاي اولیه حاصله شمارش شده و میانگین تعداد آنها بدست آمد. تمایز سلولهاي بنیادي عصبی به سلولهاي بالغ سیستم عصبی با قرار دادن سلولهاي بدست آمده از نوروسفرها در محیط کشت تمایزي انجام شد و بمنظور تشخیص این سلولها از تکنیک ایمونوسیتوشیمی و نشانگرهاي اختصاصی آنها استفاده شد. یافته ها: سوسپانسیون سلولی بدست آمده از بافت تحت بطنی نیمه سري بطنهاي طرفی مغز موش بالغ 7 تا 10 روز پس از انکوبه شدن در محیط کشت نوروسفر، کلونیهاي چند ظرفیتی بنام نوروسفر ایجاد نمود. میانگین تعداد 505 تخمین زده شد. خاصیت چند ظرفیتی نوروسفرهاي بدست آمده با ± نوروسفرهاي بدست آمده از این ناحیه 62 قرار گرفتن سلولهاي حاصله از نوروسفرها در محیط کشت تمایزي با ایجاد سلولهاي اصلی سیستم عصبی مرکزي یعنی نورون، آستروسیت و الیگودندروسیت نشان داده شد. نتیجه گیري: به دلیل کمبود مارکرهاي خاص براي شناسایی سلولهاي بنیادي عصبی روش ایجاد نوروسفر در محیط آزمایشگاهی روشی مطمئن و انتخابی براي جداسازي، مطالعه و درك بیولوژي سلولهاي بنیادي عصبی رویانی و بالغ میباشد.

عنوان انگليسی

Isolation of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Brain Using the Neurosphere Assay

خلاصه انگلیسی

Background &Objectives: Stem cells are a class of undifferentiated cells that are able to differentiate into specialized cell types. The discovery of such cells in the adult mammalian central nervous system (CNS), an organ traditionally thought to have little or no regenerative capacity, opened the door to treatment of degenerative diseases of CNS like Stroke, Parkinson, Alzheimer and Spinal Cord Injury. Thus, here we described the isolation of neural stem cells from the adult mouse brain using the neurosphere assay (NSA) and differentiation of these cells to neural adult cells in details. Methods: The rostral part of the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricles in the adult mice was dissociated into single cell suspension and cultured using NSA. Primary neurospheres were counted seven days after plating and then the mean number of neurospheres was recorded. The differentiation of neural stem cells into adult neural cells was accomplished by plating the neurosphere-derived cells in differentiating media. Immunocytochemistry and specific markers were used for the identification of the adult neural stem cells. Results: The cell suspension obtained from the rostral part of the SVZ of the lateral ventricles generated multipotential colonies, called neurospheres, 7 to 10 days post- incubation. The mean number of neurospheres generated from SVZ was 505±62. The multipotentiality of the neurospheres was shown by palting them in differentiating media and generating adult neural cells including neuron, astrocyte and oligodendrocyte. Conclusion: Owing to their rarity and paucity of neural stem cell specific markers, the NSA is a common and selective method for isolating and understanding the biology of embryonic and adult neural stem cells.

Document Downloads