جداسازی و تعیین خصوصیت ناحیه دمی لوله عصبی جنین جوجه به روش RT-PCR

خلاصه فارسی

سابقه و هدف:در طی فرآیند نورون زایی در مهره داران، صفحه عصبی خلفی که شامل منطقه بنیادی است، بسته نمی شود. این وضعیت باعث تطابق با طویل شدن محور بدن می گردد تا نخاع در حال تکوین را بسازد. جمعیت سلولی واقع در انتهایی ترین بخش طناب نخاعی دارای ویژگی دوگانه مزودرمی/عصبی هستند. بسته به این که به بخش های قدامی صفحه عصبی خلفی جابجا شوند و یا اینکه طی گاسترولاسیون به مزودرم پیش سوماتی زیرین تبدیل شوند. به دنبال ترشح FGF از مزودرم پیش سومایتی سلول های واقع در این صفحه در حالت تکثیری باقی می مانند. زمانیکه سلول ها به نواحی قدامی تر به سمت لوله عصبی بسته جابجا می شوند تحت تاثیر اسید رتینوئیک ترشح شده از سومایت به نورون تمایز پیدا می کنند. هدف از این مطالعه تعیین هویت ناحیه خلفی صفحه عصبی و ارزیابی سلول های این منطقه بعد از جداسازی بود. مواد و روش: تخم مرغ های نطفه دار حدود 28-33 ساعت در دمای 35-37 درجه و رطوبت نسبی 50-60 درصد در داخل انکوباتور قرار داده شدند تا جنین ها به مرحله 8-9 بر طبق جدول تکوینی Hamburger-Hamilton برسند. سپس جنین های روی سطح زرده تخم مرغ جداسازی شده و بخش خلفی صفحه عصبی از آنها جدا شد. سپس سلولها به داخل محلول ترایزول انتقال یافتند و پس از استخراجTotal RNA سنتز cDNA صورت گرفت و با انجام PCR تکثیر ژن های موردنظر با استفاده از پرایمرهای اختصاصی بررسی شد. بخشی از بافت های جدا شده به ظروف کشت 24 خانه ای حاوی محتوی DMEM/F12+Glutamax +10%FBS + 1%NEAA+1%Pen/Strep انتقال داده شده و به مدت 11 روز کشت داده شدند. نتایج: نتایج ما نشان داد که سلولهای ناحیه خلفی بافت عصبی در محیط کشت تواتایی تکثیر و تبدیل به سلول هایی با ظاهر نورونی را دارند. همچنین این سلول ها نشانگر های نشان دهنده هویت منطقه خلفی عصبی از جمله Pax3، Delta-1، Brachyury، Sox2 را بیان کردند که از طریق RT-PCRبیان ژن های ذکرشده اثبات شد. نتیجه گیری: سلولهای ناحیه دمی لوله عصبی جنین جوجه در منطقه خلفی عصبی از هویت دوگانه مزودرمی – عصبی برخوردار بوده و به دنبال جدا شدن از مزودرم زیرین توانایی تکثیری خود را از دست داده و هویت نورونی پیدا می کنند.

عنوان انگليسی

Isolation and RT-PCR-based characterization of the caudal neural plate in the chick embryo

خلاصه انگلیسی

Objective and Aim: During vertebrate neurogenesis, the caudal neural plate (CNP)—consisting of a stem zone—remains open. It adopts with the extension of the body to form the developing spinal cord. In the caudal most part of the stem zone, the cell population has a dual neural/mesenchymal fate, depending on whether they move to the cranial part of the stem zone or gastrulate to form the underlying presomitic mesoderm. Due to FGF signaling in presomitic mesoderm, the cells residing in the CNP are in a proliferative state. When the cells migrate cranially to the closing part of the neural tube, they differentiate into neurons. Here, they are exposed to retinoic acid (RA), secreted from the somites. The aim of this study was to characterization of the caudal neural plate and evaluation of their cells after isolation. Methods The hen' s fertilized eggs were incubated for about 28-33h at 35-37° c and 50-60% humidity until the embryos reached to stages 8-9 according to Hamburger-hamilton developmental stage table.Then the embryos were removed from egg' s yolk and the caudal neural plate was isolated and subjected to PCR to study their gene expression profile. For the primary culture, the CNP explants were transferred into 24 well culture dishes and cultured up to 11 days in DMEM/F12+Glutamax +10%FBS + 1%NEAA+1%Pen/Strep medium. Results The caudal neural plate cells proliferated in culture condition and acquired the neural phenotype in the culture condition.They also expressed markers including Sox2, Delta1 and Brachyury, Pax3, BMP4 by RT-PCR method. Conclusion The CNP explant derived cells showed a neural progenitor/mesenchymal fate by expressing Sox2, Delta1 and Brachyury genes.They can acquire neural phenotype and identity when separated from the underlying mesoderm and cultured in vitro.

Document Downloads